Кальций и рак: какая связь между приемом кальция и онкологическими заболеваниями? Почему кальциевые препараты помогают не всем? Как поднять кальций у онкологических больных.

Как кальций защищает от опухолей?
Традиционная медицина уже давно начала вызывать у нас сомнения – как говорится, «одно лечит, другое калечит». Кроме того, вместо устранения причин болезни медики пытаются бороться с симптомами – и не удивительно, что без особого успеха. Это относится и к общепринятым методам лечения рака: после химиотерапии и оперативного вмешательства часто наступают рецидивы. Да и в случае выздоровления общее состояние здоровья и умственные способности неизбежно ухудшаются). Почти целое столетие врачи не желали прислушиваться к важному открытию, которое сегодня, наконец, сумели подтвердить. Оказывается, профилактика опухолей крайне проста, да и сама болезнь больше не может считаться неизлечимой!
Что провоцирует рак?

Известный немецкий биохимик и физиолог Отто Варбург ещё в 1931 году получил Нобелевскую премию, доказав, что процесс развития рака является анаэробным – то есть опухоль развивается только тогда, когда организм испытывает недостаток кислорода в крови и, следовательно, клетках организма. Вообще дефицит кислорода - первопричина всех болезней в целом.

Почему же кислорода не хватает? Если не брать во внимание малоподвижный образ жизни, то причиной является неспособность организма его усваивать в принципе. Оказывается, когда кислотность крови возрастает, она способна переносить в 10-20 раз меньше кислорода!

Кислотность, или рН воды, указывает на соотношение положительно заряженных ионов водорода () и отрицательно заряженных гидроксид-ионов (). Если их количество одинаково, раствор считается нейтральным. Если к этой воде добавить кислоты, она связывает гидроксид-ионы – и концентрация ионов водорода относительно увеличивается (кислый раствор). Если добавить в нейтральный раствор щёлочь, происходит обратная реакция: концентрация ионов водорода падает, а содержание гидроксид-ионов повышается (щелочной раствор).

Давайте посмотрим, что происходит в организме при употреблении той или иной пищи. Допустим, на обед у нас овощи, фрукты, орехи, бобы – эти продукты содержат кислоты – и потому требуют в основном щелочных реакций в желудке, так что рН крови остаётся нормальным. А теперь представим, что вместо овощей мы съели фаст-фуд, сладости, какие-нибудь чипсы и прочий мусор из киоска, который запили чашкой кофе. В ответ на щелочную пищу желудок вырабатывает больше кислоты - которую затем вместе с растворённой едой кровь будет переносить по всему организму. В крови, как мы знаем, кислота связала гидроксид-ионы (), а оставшийся водород () вместе с кислородом образует перекись водорода (Н2О2) – мощное удобрение для раковых клеток! Так что питаясь постоянно нездоровой пищей, человек приближает свои шансы заработать самые разные болезни до 100%.

В одной из своих лекций Отто Варбург говорил: «Рак, в отличие от других заболеваний, имеет бесчисленное множество вторичных причин возникновения (радиация, свободные радикалы, токсины), - но, грубо говоря, есть всего одна основная причина рака - это замена кислородного дыхания в теле нормальной клетки на гликолиз». Это значит, что раковые клетки получают основную массу энергии, при отсутствии кислорода расщепляя глюкозу до молочной кислоты – причём с гораздо большой скоростью, чем это делают печень, почки, поджелудочная или подчелюстная железы.

В начале 2009 года журналы «Journal of Lipid Research» и «Вокруг света» сообщили, что после долгих сомнений (а может быть, и умышленного пренебрежения) раковая теория Отто Варбурга получила новое подтверждение. Исследователям из Бостонского колледжа (Boston College) и Медицинской школы при Вашингтонском университете (Washington University School of Medicine) удалось получить новые доказательства в поддержку идей выдающегося учёного 20 века – а, значит, пришла пора брать их на вооружение!

Как защитить себя?

Любой учёный, который занимается изучением рака, знает: рак не живёт в щелочной среде (обогащающей кровь кислородом). Если поместить раковую опухоль в щелочной раствор, то всего через три часа все аномальные клетки погибнут!

Продолжая свои исследования, Отто Варбург пришёл к выводу, что профилактикой и эффективным лечением опухолей может выступить кальций - который, как известно, является щелочью! То есть природный мел или толчёная яичная скорлупа с соком цитрусовых – это мощнейшее лекарство. С одной стороны, это открытие доказывает: быть здоровым совсем несложно. С другой стороны, такой тезис способен убить на корню дорогостоящую фармацевтическую отрасль и вообще необходимость в услугах врачей – на карту поставлены триллиарды долларов… Не удивительно, что открытие учёного ждал весьма холодный приём.

Однако доказательства были получены ещё в первой половине 20 века! Анализы на биохимию крови у неизлечимо больных людей (рак 3-ей и 4-ей степени) показывали: у всех больных налицо серьезная нехватка кальция. Это открытие Варбургу помог сделать Карл Рич - известный врач и впоследствии коллега по исследованиям. Он лечил людей от артрита, поэтому доктор назначал им препараты кальция. Среди пациентов Карла Рича были и больные раком в заключительной стадии – и поскольку в их крови отмечался недостаток кальция, они получали такие же препараты. Когда эти пожилые люди скончались, результаты вскрытия ошеломили учёных: оказалось, летальный исход наступал из-за старости, а вот от рака не осталось ни малейшего следа - ни опухолей, ни метастаз.

То есть, восполнив дефицит кальция и восстановив щелочной баланс, а так же питаясь растительной пищей и занимаясь спортом на свежем воздухе, можно обратить болезнь вспять – или просто не подпускать её к себе на пушечный выстрел. Кроме того, необходимо свести к минимуму пользование мобильными телефонами, беспроводным интернетом, блютусом, пищевым пластиком, а так же полностью отказаться от микроволновых печей, любых пищевых добавок, дезодорантов-антиперсперантов. Все эти вещи несут в себе не столько опасность здоровью, сколько абсолютную гарантию его потери. Позаботьтесь о себе и о своих близких, поделитесь полезными знаниями со знакомыми и коллегами: «предупреждён - значит вооружён»!
взято тут:

В любом отделении больницы есть в наличии глюконат кальция. Отзыв врача, использующего этот препарат, говорит о том, что без этого лекарственного средства невозможно лечение многих заболеваний, особенно таких, когда клетки организма особо нуждаются в кальции.

Необходимость ионов кальция для организма

Кальций является одним из основных элементов, необходимых для нормальной функции человеческого организма и при исследовании обнаруживается во всех тканях. Глюконат и хлорид кальция - эти растворы солей являются, пожалуй, наиболее популярными для лечения угрожающих жизни состояний, связанных с гипокальциемией и гиперкалиемией. Дополнительные показания включают острую тяжелую гипокальциемию, отравления бета-блокаторами или блокаторами кальциевых каналов.

Кальций может вводиться парентерально в виде двух различных форм: хлорид и глюконат. Чаще всего назначается Отзывы свидетельствуют, что при таком введении минимум неприятных ощущений и хорошая переносимость. 10 мл 10%-го раствора содержат 8.9 мг/мл элементарного кальция. В отличие от этого ампула 10%-го хлорида кальция обеспечивает в три раза более высокую концентрацию элементарного кальция (27.2 мг/мл). можно вводить только внутривенно, так как он вызывает при случайном попадании под кожу. Глюконат кальция (отзыв медработников тому подтверждение) - это наиболее предпочтительный вариант у пациентов, которые не страдают гемодинамической нестабильностью. Однако глюконат в печени метаболизируется до ионов кальция и становится биодоступным, поэтому в условиях нестабильной гемодинамики или плохой функции печени предпочтительнее использовать кальция хлорид. Так что, если показано назначение кальция глюконата, его можно заменить кальция хлоридом, но использовать только треть дозы и помнить, что назначение кальция хлорида целесообразно при хорошем венозном доступе с постоянным контролем в процессе введения.

Свойства лекарства

Глюконат кальция - это соединение кальция и глюконовой кислоты.

Кальций требуется для эффективной работы сердца, мышечной и нервной систем. Доказана необходимость для правильного процесса формирования тромбов в крови применения средства "Глюконат кальция". Отзыв врачей доказывает, что при заболеваниях, где высокие уровни кальция необходимы, например, при гипокальциемии, тетании, аллергических и воспалительных процессах, некоторых видах отравления, терапия без этого препарата будет неэффективной.

Глюконат кальция обычно назначается врачом, когда имеются показания. В каждом отдельном случае дозировка подбирается индивидуально.

Если во время использования препарата возникает ухудшение состояния, то требуется пересмотреть назначение или уменьшить дозировку препарата. При приеме больным большого количества лекарства возможны различные осложнения.

Показания

Имеется много различных болезней, при которых показано назначение препарата "Кальция глюконат". Инструкция, отзывы многих практикующих врачей позволяют выделить группы заболеваний, основной причиной которых является:

• гипокальциемия;
• повышение мембранной проницаемости;
• нарушение восприимчивости нервных импульсов миоцитами.

Оправдан прием лекарства при:

• гипопаратиреозе (остеопорозе, латентной тетании), нарушении обменных процессов, особенно витамина Д: рахит (остеомаляции, спазмофилии), гиперфосфатемии у больных с почечной недостаточностью;
• повышенной потребности в ионах кальция: при беременности, в период лактации и усиленного роста организма; недостаточном содержании кальция в пище, нарушении его обмена (в постменопаузе);
• усиленном выведении ионов кальция, например, при длительном постельном режиме, хронической диарее, вторичной гипокальциемии при длительном приеме диуретиков и противоэпилептических средств, глюкокортикостероидов;
• отравлении солями магния, фтористой, щавелевой кислотами и их солями;
• гиперкальциемической форме пароксизмальной миоплегии.

Показан глюконат кальция при аллергии. Отзывы свидетельствуют о быстром улучшении состояния, так как он уменьшает проницаемость капилляров и снижает отечность. Это его свойство используется для лечения тромбоцитопенической пурпуры и экссудативных дерматозов, таких как герпетиформный дерматит.

Противопоказания

Медицинский работник назначает препарат с особой осторожностью или не назначает его, если пациент:

Глюконат кальция назначается с особой осторожностью или не назначается совсем детям и подросткам моложе 18 лет.

Побочные эффекты

В медицине существует правило, что препарат назначается только тогда, когда клинические испытания показали, что преимущества приема лекарства перевешивают риски. Некоторые побочные эффекты могут быть серьезными, а другие могут быть расценены как незначительные неудобства.

У различных больных реакция на лекарства разная. Трудно предсказать, какие побочные эффекты будут у вас от приема конкретного лекарства, или будут побочные эффекты на все препараты. Главное - необходимо обязательно сообщить своему лечащему врачу о возникших неприятных ощущениях.

Реакции на прием препарата могут возникнуть во многих случаях:

Если вы чувствуете себя плохо или у вас есть опасения по поводу побочного эффекта, обязательно сообщите об этом медицинскому работнику.

Прием других лекарственных средств

Если вы принимаете более одного лекарства, они могут взаимодействовать друг с другом, усиливая или снижая эффективность друг друга.

Решение об использовании лекарственных средств, которые взаимодействуют, зависит от конкретных обстоятельств. В таких случаях необходимо изменить дозу или контролировать прием препарата более тщательно.

При назначении лечения необходимо сообщить врачу названия всех лекарств, которые вы принимаете. При этом будут учитываться все возможные взаимодействия. Сюда входят все лекарства, которые прописал ваш врач, стоматолог, медсестра, акушерка или фармацевт. Вы также должны сказать о лекарствах, которые вы купили в аптеке без рецепта.

Если вы принимаете кальция глюконат и один из вышеперечисленных препаратов или видов лекарств, убедитесь, что ваш врач знает об этом.

Свидетельствуют о несовместимости препарата "Глюконат кальция" отзывы. Таблетки или инъекционный раствор невозможно сочетать с карбонатами, салицилатами, сульфатами. Это подтверждается огромной практикой применения этого лекарственного средства. Образование комплексов с тетрациклинами снижает антибактериальный эффект последних. При лечении парентеральное применение кальция глюконата не показано из-за усиления токсического действия гликозидов. Глюконат кальция и тиазидные диуретики могут усиливать гиперкальциемию. Снижается эффект кальцитонина при гиперкальциемии и биодоступность фенитоина при совместном применении с этим препаратом.

Такие лекарственные средства, как цефтриаксон, блокаторы кальциевых каналов, или тиазидные диуретики, не сочетаются с препаратом "Глюконат кальция", так как происходит снижение эффекта взаимодействующих препаратов.

Дополняющие препараты и витамины

Глюконат кальция может сочетаться с взаимодополняющими препаратами и витаминами. В общем, существует не так много доступной информации об их взаимодействии. Если вы собираетесь принимать или уже принимаете любые препараты и витамины, вы должны спросить вашего врача о наличии известных эффектов при совместном применении с глюконатом кальция.

Диета

Лекарства могут взаимодействовать с рядом пищевых веществ. В некоторых случаях это может быть вредно, и врач может посоветовать придерживаться определенной диеты.

В случае приема кальция глюконата нет конкретных продуктов, которые необходимо исключить из своего рациона. И даже употребление алкоголя не повлияет на эффективность лекарства.

Планирование семьи и беременности

Большинство лекарств может повлиять на развитие ребенка в утробе матери. При приеме глюконата кальция не стоит заниматься самолечением. Лекарство может назначить только ваш лечащий врач.

Вам нужно обсудить конкретные обстоятельства с врачом, чтобы взвесить общие риски и преимущества приема данного лекарства. Вы и ваш врач принимаете решение о том, будете ли вы принимать это лекарство во время беременности.

Если решение заключается в том, что вы не должны использовать кальция глюконат, вы должны обсудить, есть ли альтернативное лекарство, которое можно принимать во время беременности.

Это лекарство проникает в грудное молоко, поэтому кормящим матерям требуется взвесить все риски и преимущества такого назначения.

Только врач решает вопрос целесообразности назначения препарата "Глюконат кальция" детям. Отзывы педиатров соответствуют положению о том, что маленькие пациенты хорошо переносят лекарственное средство.

Формы введения

Возможное введение препарата "Кальция глюконат" - внутримышечно. Отзывы многих врачей говорят, что этот способ безопасен, при этом происходит более длительное действие лекарственного вещества. Внутривенное введение используется при острых состояниях или для достижения быстрого эффекта. Такой способ более приемлем для детей по схеме 2-3 дня с однодневным перерывом по 1-5 мл. В/м вводится только взрослым каждый день или тоже по схеме прерывистым курсом: 2-3 дня приема - 1 день перерыв - 2-3 дня введения.

Таблетки принимают 2 или 3 раза в день по 1-3 г (2-6 таблеток), не смешивая с едой и желательно запивая молоком.

Имеется множество показаний для использования средства "Глюконат кальция". Отзыв терапевта или педиатра позволяет сделать вывод, что предназначение каждого лекарства - это стабильность, безопасность и эффективность. Только с этих позиций показано применение препарата.

Пугающие своим постоянством боли в костях, заставляют меня мониторить русско- и англоязычный интернет, допрашивать врачей и экспериментировать с физическими нагрузками, в надежде найти действенный метод борьбы с надвигающимся остеопорозом. Не претендуя на знание абсолютной истины, мне хотелось бы показать здесь в виде некоторого подобия дайджеста то, что удалось нарыть по этой теме и в какую картинку информация сложилась в моей голове, выслушать вашу аргументированную критику и, возможно, внести в этот пазл:) некие изменения и дополнения. Итак, ИМХО.
I . Гормонозависимыми являются опухоли со следующими характеристиками:

ER+ PR+ Her2(new)+++ ER+ PR- Her2(new)+++ ER + PR + Her 2(new )- , где ER - Эстроген, гормон первой половины цикла и PR - Прогестерон, гормон второй половины цикла.
Похоже, что а) конфигурация ER - PR + на практике не встречается и б) если в организме становится мало эстрогенов, то автоматически исчезает и прогестерон. Вроде бы это логично, так как если нет цикла, то нет и гормона второй половины цикла:) Поэтому воздействие гормонотерапии направлено только на эстроген, а не на прогестерон.
Her 2(new )+++ означает гиперэкспрессию белка, который стимулирует опухоль к особенно активному росту. Her 2(new ) - = Her 2(new ) + и оба эти значения говорят об отсутствии гиперэкспрессии белка. Her 2(new )++ говорит о неопределенности наличия гиперэкспрессии белка и в данном случае требуется уточнение, путем проведения FISH - анализа, с дальнейшим отнесением либо к Her 2(new )+++, либо к Her 2(new )+.
II . При гормонозависимых опухолях задачей гормонотерапии является снижение воздействия эстрогенов на рецепторы опухоли. Это достигается двумя способами.
1. Блокирование рецепторов опухоли к эстрогенам достигается с помощью Тамоксифена. Этот метод не ведет к уменьшению количества эстрогенов, потере кальция и остеопорозу.
2. Снижение количества эстрогенов в организме. Для этого применяются Ингибиторы ароматазы (Фемара, Летрозол, Аримидекс и. т.п.), которые, блокируя ароматазу, снижают количество эстрогенов, конвертируемых из подкожной жировой клетчатки и надпочечников.
Ингибиторы назначают только в случае подтвержденной менопаузы, или после проведения курса Золадекса, который выключает функцию яичников.
Снижение количества эстрогенов ведет к вымыванию кальция из костей, уменьшению костной массы, остеопорозу и, в дальнейшем, к довольно фатальным последствиям:(
Кроме того, в англоязычном интернете бытует мнение, что при HER 2(new )+++ тамоксифен неэффективен и, в данном случае, при пременопаузе, следует сначала назначать Золадекс и, затем, Ингибиторы. Таким образом, все больше женщин принимают ингибиторы ароматазы и рискуют получить фатальный остеопороз.
III . Краткий перечень рекомендаций по профилактике остеопороза, которые были обнаружены мною в сети, получены при реальном общении с российскими и американскими врачами, а также выстраданы посредством личного опыта:)
1. Зомета. Традиционно ее применяют при метастатическом раке для борьбы с костными метастазами. В последнее время в Америке и Германии ее начали применять в адъювантном режиме на ранних стадиях, с целью профилактики развития метастазов. Кроме того, в результате ее применения укрепляется костная ткань и снижается риск остеопороза. Имеет серьезные побочные эффекты. В Америке в адъювантном режиме Зомету капают один раз в 6 месяцев, а в Германии - раз в месяц в течение года. В России данный метод пока вроде бы не применяется.
2. Препараты кальция. Кальций Д3 и Кальцемин эдванс. Моя гинеколог с какой-то конференции по остеопорозу привезла утверждение, что по последним научным данным для лучшего усвоения кальция, его препараты (так же как и содержащие кальций продукты) следует принимать вечером, а утренний прием кальция бесполезен. Однако в сети существует мнение, что кальций в любом случае одинаково плохо усваивается, и, кроме того, эти препараты несут какой-то риск для сердечной мышцы. Кто прав - непонятно.
3. Творог. На американских ресурсах предостерегают от его чрезмерного употребления (особенно жирного) в связи с повышением риска рецидива из-за высокого содержания в твороге животного белка и животного жира.
4. Чернослив. На форуме сайта breastcancer .org обсуждается загадочный феномен. Какой-то врач, наблюдая за своими пациентами, заметил, что те из них, которые регулярно употребляют в пищу чернослив, имеют гораздо менее выраженные потери костной массы в менопаузе. Затем американцами было проведено исследование, которое подтвердило данный вывод. Что именно, содержащееся в черносливе, способствует накоплению костной массы, на данный момент непонятно, однако замечено, что не все виды слив обладают этим действием, а только те, из которых делают сухофрукты. И, чтобы не ошибиться, с данной целью следует употреблять именно чернослив-сухофрукт, а не свежие ягоды. Причем исследователями даже разработана схема употребления чернослива:). Следует начинать прием с 1-2 ягод в день, постепенно доводить ежедневное употребление до 10 ягод и продолжать это дело бесконечно:). Интересно, что чернослив, по сравнению с курагой и изюмом, обладает более низким гликемическим индексом, вроде бы безопасен с точки зрения увеличения количества эстрогенов и, соответственно, провоцирования рецидивов. По-моему, так очень симпатично-оптимистичная теория. Я уже закупила кило чернослива. (Остается только надеяться, что эта публикация не была проплачена индийской черносливовой мафией:)
5. Физические упражнения. С тем, что практически любые физические упражнения способствуют профилактике остеопороза, а также снижают риск рецидива, согласны абсолютно все. Особенно полезными для костно-мышечной системы считаются занятия с отягощениями, что, в ситуации РМЖ, является тонким и спорным вопросом. На основании собственного опыта могу сказать, что плавание практически не уменьшает боль в костях и суставах, ходьба - довольно эффективна в процессе, но утром следующего дня по-прежнему больно начинать движение. Самым эффективным (по моим субъективным ощущениям), на сегодняшний день для меня являются занятия на велотренажере, которые я провожу, не выходя за пределы пульса 100-110. Тренировка выглядит так: 10 минут - просто кручу педали, не выходя за пределы пульса. 10 минут - кручу и провожу растяжку плечевого пояса в различных направлениях. 10 минут - кручу педали + упражнения с очень легкими (0.5 - 1 кг) гантелями (бицепс, трицепс и дельта). 10 минут - снова легкая растяжка и просто работа ногами. Затем, растяжка ног, стоя на полу и, в положении лежа на на спине, бицепс, трицепс, грудная мышца с гантелями 1-2 кг и с последующей растяжкой. И после такой трени утром у меня практически ничего не болит:))) При этом, надо отметить, что я начинала применять данный комплекс упражнений очень-очень осторожно и постепенно наращивая нагрузку. Начинала с 5-10 минут на тренажере, с пульсом 90-100, без всяких отягощений и с обязательным использованием эластичного рукава для предотвращения лимфатического отека.
6. Хатха- Йога. Как недоучившийся йогатичер:) могу сказать, что - Позы стоя совершенно однозначно ведут к укреплению костной системы и практически не имеют противопоказаний, если не фиксировать позу слишком долго. Выходить из позы следует сразу после появления ощущения любого мало-мальского дискомфорта. - Осторожные наклоны, прогибы и скручивания улучшают кровообращение в районе позвоночника и, скорее всего, также полезны для костей. - А вот балансы на руках и перевернутые позы , которые очень даже способствуют у здоровых людей укреплению костной ткани, для нас, скорее всего, в силу особенностей хирургии, становятся абсолютно недоступными:(. Но я еще их попробую, конечно, потом.
7. Приятный бонус:) Составляя программу тренировок, на форуме бодибилдеров я вычитала, что активные и целеустремленные женщины в менопаузе, благодаря низкому количеству эстрогена имеют очень хорошие шансы для накачки красивого мышечного рельефа и избавления от целлюлита:) Специалисты по фейсбилдингу (безоперационной подтяжке кожи лица, путем накачивания мимических мышц с помощью специальных упражнений) также считают, что эта методика наиболее действенна в менопаузе:) А безбашенные бодибилдеры обоих полов добровольно принимают те же самые "наши" ингибиторы для более качественной проработки своих безумных рельефов:)))
Очень хотелось бы совместными усилиями исправить, дополнить и довести до совершенства этот перечень:)

Применение углекислого кальция и магния

Любое ощелачивание означает усиление анаболических процессов, в том числе и в опухоли, что должно увеличивать ее рост. Известно, что простое одностороннее увеличение применения минералов и воды тоже способствует росту опухоли. Нами этот факт учтен. Но полностью без ощелачивания обойтись нельзя, тем более, если мы хотим завысить кислотную фазу и ограничить органическую часть щелочной фазы. Лучше всего для этого подходит ощелачивание не с помощью усиленного приема щелочных пищевых веществ, а преимущественно с помощью минералов, таких как каменное масло , кальциевый мицеллат (мицеллат - препарат углекислого кальция и магния, полученный из меловых ископаемых), серебряная вода, морская соль и, частично, глицерин (низкомолекулярная органика).

В первую очередь минералы усиливают анаболическую фазу в онкоклетках, т. е. заставляют их увеличивать потребление органики для дальнейшего роста. Но при этом в присутствии избытка низкомолекулярных кислот клетки вынуждены насыщаться легкодоступными кислотами. Не питая клетки, они интенсивно ощелачивают среду, что очень важно в борьбе с опухолями.

Вокруг опухолей обычно создается токсическое облако кислот, которые защищают ее от иммунитета и отравляют весь организм. Все кислоты надо интенсивно выводить. Для этого больше всего и подходят щелочные минералы. Они активно связываются с вредными кислотными метаболитами и выводят их с мочой, чем помогают бороться с опухолевыми болями, очищают среду вокруг опухоли, делают ее видимой для иммунитета или, другими словами, иммуногенной.

Но достаточно долго держать организм на одних минералах не удается, так как наступает истощение. Поэтому необходимо снабжать его небольшим количеством питательных жировых веществ. Лучше всего для этих целей подходят глицерин (низкомолекулярный трехатомный спирт), малокалорийный, но сильно ощелачивающий и оказывающий выраженное противоотечное действие.

Многие пациенты при его приеме отмечают быстрое ослабление онкологических болей, что очень важно. В качестве жировых липидов хорошо подходят льняное масло и рыбий жир, которые содержат омега-3 кислоту, которая в отличие от других липидов имеет противоположное действие, не стимулирует рост опухоли и в тоже время несет пищевую (пластическую) функцию, способна поддерживать организм «на плаву», питая его, а не опухоль. В практике отмечены и случаи облегчения состояния при применении желтков яиц, что связано с большим содержанием в них омега-3 кислоты. Но яйца при этом должны быть взяты исключительно от домашних куриц, пасущихся на зеленой траве, т. е. постоянно употребляющих хлорофилл.

Основная цель нашей методики - не просто ослабить питательные процессы в самой опухоли, что крайне сложно, но возможно, а вызвать в ней мощные продолжительные разрушительные катаболические процессы. Именно поэтому после еды больному предлагается набор органических кислот в превышающих норму количествах. Они одновременно являются балансирующей противофазой избыточно употребляемых нами минералов, уравновешивая кислотно-щелочной баланс. Опухоль как наиболее агрессивная структура будет первой перехватывать на себя все кислоты. Но долгое время питаясь в режиме избыточного потребления кислот, она тем самым стимулирует катаболические процессы в самой себе. Ловушка сработала!

В качестве важнейшего ощелачивающего вещества мною предлагается длительное применение каменного масла (магниевых квасцов). Но и этого не достаточно.

Дополнительно мною предложено использовать кальциевый мицеллат. Это только один, хотя и важный, минерал из многочисленной группы важных щелочных минералов, предназначенный для лечения рака. К таким минералам также относится и орская соль, метод катионидов и другие. Важное значение в защелачивании организма имеют соли кальция. Именно кальций играет ведущую роль в сложной буферной системе организма, поддерживающей гомеостаз кислотно-щелочного баланса.

Мицеллат углекислого кальция

Кальциевые препараты, например мицеллат углекислого кальция , повышают ОВП (окислительно-восстановительный потенциал) внутренней среды организма.

Дело в том, что для оптимального использования в обменных процессах организма поступающая извне вода должна обладать окислительно-восстановительным потенциалом, соответствующим значению ОВП внутренней среды организма. Чем больше разница ОВП поступающей воды и внутренней среды, тем больше энергии затрачивается на проникновение воды в клетку.

Если поступающая в организм питьевая вода имеет ОВП, близкий по значению к ОВП внутренней среды, то электрическая энергия клеточных мембран (жизненная энергия организма) не расходуется на коррекцию активности электронов воды. Она тотчас же усваивается, поскольку обладает биологической совместимостью по этому параметру. Если питьевая вода имеет более отрицательный ОВП, чем ОВП внутренней среды организма, то она подпитывает его своей энергией, которая используется клетками как энергетический резерв антиоксидантной защиты от неблагоприятного влияния внешней среды.

Многие исследователи пытались применить соли кальция для лечения опухолей у животных и человека. При этом в ряде случаев отмечалось уменьшение размеров экспериментальных злокачественных новообразований, ослаблялась их способность разрушать окружающие ткани (С. С. Яковлев, 1980 г.) и увеличивалась продолжительность жизни онкологических больных.

На фоне облучения препараты кальция иногда приводили к полному излечению рака вульвы и опухолей костей. Их применение у больных остеогенной саркомой 3-и стадии показало, что срок жизни возрастал в 1,5 раза по сравнению с теми пациентами, которые не принимали этого препарата при прочих равных условиях (В. В. Прошин, 1977 г.).

Во избежание возрастного остеопороза и предупреждения хрупкости костей при раке надо употреблять богатые кальцием и витамином Д продукты, тем более что этот витамин - важное средство профилактики рака.

Автореферат диссертации по медицине на тему Влияние глюконата кальция на токсичность и лечебное действие адриамицина

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК * ;" ОЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи УДК 616-006-073: 615". 33

СМИРНОВА Галина Борисовна

ВЛИЯНИЕ ГЛШШАТА КАЛЬЦИЯ НА ТОКСИЧНОСТЬ И ЛЕЧЕБНОЕ ДЕЙСТВИЕ АДРИАМЙЦШ1А

Научные руководители: Доктор биологических наук Т.А.Богуш

Кандидат физико-математических наук Е.П.Баранов

"Москва - 1994

Работа выполнена в Онкс~огическом научном центре

Российской академии медицинских наук Научные руководители: Доктор биологич» снлх наук Т.А.Богуш Кандидат физико-математических наук Е.П.Баранов

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук И.С.Буренин Доктор медицинских наук, профессор А.Ф.Бухны

Бедущье учреждение:

Научно-исследовательский институт онкологии им. П.А.Герцена

Задета диссертации состоится "г

в "_" часов на заседании Специализированного совета

К.001.17.01 пп защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Онкологическом научном центре РАМН (Москва, 11547&, Каширское шоссе, 24)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Онкологического научного центра РАМН

Ученый секретарь Специализированного совета доктор медилссяих каук

профзссср " Е.С.Турусоз

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Актуальной проблемой современной химиотерапии злокачественные новообразований является повышение эффективности широко применяемых в клинической практике противоопухолевых препаратов.

Большинство известных лекарственных средств, а к их числу относятся и большая группа противоопухолевых препаратов антрацик-линового ряда, которые нашли широкое применение при лечении самых разных онкологических заболеваний, обладают выраженными побочными эффектами. Последнее для антрациклинов особенно существенно, так как для этой- группы цитостатиков существует ограничение применения по суммарной дозе: продолжительность лечения антрациклинами лимитируется не только потерей чувствительности опухоли к цитос-татику, но и достижением максимума суммарной дозы (550 мг/м2), после которого лечение прекращается, так как резко возрастает опасность развития кардиотоксичности. Клиническое использование этой группы препаратов часто ограничивается также из-за их острой и хронической токсичности, характеризующейся прежде всего супрессией миелоидного росгка кроветворения, стоматитом, тошнотой, рвотой, аллопецией.

Известно, что проявление биологической активности антрациклинов зависит от количества антибиотика, поступившего в клетку. На клеточном уровне этот процэсс регулируется трансмембранным транспортом. Вхождение препаратов в?<летку осуществляется за счет диффузии, тогда как выброс антибиотика из клетки - активный процесс, осуществляемый энергетическюависимыми насосачи, часть из которых Са-зависимы. В разных клетках активность этой Са-зависимой составляющей может быть различной.

В резистентных опухолевых клетках внутриклеточная концентра-

ция антрациклинов, по-видимому, поддерживается главным образом за счет работы Са-зависимых насосов, тогда как в чувствительных -определяется работой только энергетически-зависимых насосов.

Это вытекает, в частности, из результатов исследований с блокатором Са-каналов верапамилом, который ингибиоует работу Са-зависимых насссов. В чувствительных опухолевых клетках это не сопровождается изменением внутриклеточной концентрации и цитоток-сичности антибиои. .ов. Воздействие верапамила. на резистентные опухолевые клетки приводит к повышение внутриклеточного содержания антрациклинов и к увеличению их цитотоксичности. В опытах на животных этот эффект верапамила реатазуется в виде появления у резистентных опухолей чувствительности к антибиотикам. При этом также отмечается и увеличение кардиотоксичности антибиотиков, то есть одного из проявлений их токсического действия на нормальные клетки. Сказанное, с одной стороны, показывает, что воздействуя на процесс внутриклеточного транспорта антрациклинов можно регу-."чровать их биологическую активность. Но с другой стороны, свидетельствует о том, что несмотря на "привлекательность" подобного рода модификации верапамилом, применение его в клинике может быть существенно ограничено за счет повышения токсических осложнений антрациклиновых антибиотиков.

Поскольку известно, что ионы Са активируют Са-зависимые насосы, мы предположили, что в отличие от вераламила,Са-содержащие соединения должны уменьшать токсичег ие проявления "антрациклинов, а их лечебное действие в отношении чувствительных опухоле;" ^джно оставаться без изменения. Иными словами, можно ожидг.77 что Па- содержаще соединейия, не позволяя преодолеть резистентность опухоли к антибиотикам, могут быть тем не менее эффективными мо-

дификаторами биолог№ескг" активности актрациклиновых антибиотиков.

ЦЕЛИ И 2,АЧЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования является увеличение эффективности действия антрациклинового антибиотика адриамицина (АД) путем уменьшения его токсических проявлений при применении комбинации антибиотика с глюконатом кальция (ГК).

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить влияние ГК на острую, хроническую токсичность АД в опытах на мышах и кардиотоксичность в опытах на крысах.

2. Оценлть влияние ГК на лечебное действие АД на моделях трансплантируемых опухолей у мышей:

а) чувствительных к действию антрациклина; б) резистентных к антрациклину.

3. Изучить влияние ГК на внутриклеточный уровень адриамици-на в нормальных чувствительных к токсичности антибиотика.

4. Оценить возможность взаимодействия АД с ДНК в модельных экспериментах (в растворе ДНК).

5. Изучить возможность прямого химического взаимодействия ГК с АД.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Впервые проведено изучение влия..пя глюконата кальция (ГК) на острою и хроническую токсичность, в том числе кардиотоксичность, а также лечебное действие антрациклинового антибиотика АД на мо-

долях чувствительных и резистентных трансплантируемых опухолей.

С использованием нового метода прижизненной количественной оценки внутриклеточного накопления АД, разработанного в нзшей лаборатории совместно с сотрудниками Филиала Института Атомной Энергии им.Курчатова, проведено изучение влияния ГК на внутриклеточный уровень АД в нормальных клетках, чувствительных к токсичности АД и в модельных экспериментах (в растворе ДНК).

На основании полученных результатов сформулированы практические рекомендации для клинического применения ГК с целью уменьшения токсичности АД, повышения его разовой и курсовой дозы, для увеличения лечебного действия антибиотика в отношении чувствительных опухолей.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация апробирована на совместной научной конференции лаборатории медицинской химии, лаборатории токсикологии лекарств, лаборатории фармакокинетики и биодоступности, лаборатории экспериментальной эндокринной терапии опухолей и группы изучения противоопухолевых веществ ОНЦ РАМН 9 марта 1994 года.

Материалы диссертации представлены: на Московском отделении I Всесоюзного биохимического общества АН СССР, 1989; на I конференции-конкурсе НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ОНЦ РАМН, Москва, 1990 (3-я премия); на- I Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, ^992.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на страницах " машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и ме-

тодов исследования, результатов собственных исследований () обсуждения и выводов, иллюстрирована рисунками и таблицами. Список литературы включает работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Препарат и реактивы.

Препараты: адриамицин (Farmitalia, Италия), глюконат кальция (официнальный препарат, СССР). Реактивы: уксусная кислота марки "ч", натриевая соль полимерной дезоксирибонуклеиновой кислоты из эритроцитов цыплят (Reanal, Венгрия). Препараты вводили з физиологическом растворе внутрибрюшинно в дозах и режимах, указанных при описании результатов.

Животяие.

В работе использованы мыпи инбредных линий, а также их гибриды, полученные из питомника "Столбовая" РАМН и из разведения ОНЦ РАМН.

Гемобластоз La, плазмацитома МОПС-406, рак шейки матки РШМ-5 и лейкоз Р388 были получены из банка опухолевых штаммов 01Щ РАМН; Р388 с индуцированной устойчивостью к ДКС получены нами в результате ле"прстченной селекции in vivo клеток исходного штамма лейкоза Р388. Опухоли поддерживались регулярными пассатами на ы:,::пзх соответствующие линий.

Культуры клеток.

1. Монослойную культуру тран(Нормированных вирусам ЗУ-40 фкбробластов джунгарского хомячка (линия ДМ-15 - чувствительная к действию здрнампцина) культивировали в стеклянных Флаконах (<:.:> щадъ дна 20 см2) в среде Игла с добавлением 101 сивсратки кру..

го рогатого скота. Опыты проводили на сформировавшемся монослое, примерно 2х106 клеток/флакон.

2. Мопослойные культуры эпителия печени крыс.. эпителия кишечника человека культивировали в пластиковых флаконах (площадь дна 25 см2) в среде ^99 с.добавлением 102 сыворотки крупного рогатого скота. Опыты проводили на сформировавшемся монослое, примерно 2х10б клеток на флакон.

Токсикологииеасю него да.

а) Острая токсичность Оценивали по продолжительности жизни и количеству павших животных в течении 30 дней наблюдения (после введения летальных доз цитостатика).

б) Хроническая токсичность Разовая доза и схема введения АД выбраны, исходя из данных литературы по индукции хронической кар-диотоксичности (РаздиаИ-1?опс|->е^1 еЬ а1., 1980). Токсическое действие оценивали по продолжительности жизни и количеству павших жиеотных в течение всего периода после введения цитостатика и до гибели всех животных.

в) Желудо -ио-кишечная токсичность

Оценивали по изменению массы тела" мышей. Контроль за массой тела животных.во всех токсикологических экспериментах производился в течение всего периода с момента введения АД и до гибели всех животных.

г) Гематотоксичность

Оценивали по количеству лейкоцитов в периферической крови, которую брали из хвостовой вены. Подст">т лейкоцитов проводили 1 камере Горяева после гемолиза эритроцитов в 3£ уксусной кислоте. *

д) Кардиотоксичность

Эксперименты проводились на крысах. Выраженность кардиоток-

сичности АД на разные сроки эксперимента оценивали по электрокардиографическим параметрам.

Хляиотерапевтичесюю методы.

Опухолевые клетки трансплантировали сингенным животным подкожно или внутрибрюшинно в дозе 10б клеток. Терапию начинали на разные сроки после прививки. Противоопухолевое действие АД оценивали по следующим критериям: по увеличению продолжительности жизни павших животных и количеству излеченых мышей в течение 60 дней наблюдения при асцигной форме опухоли и 90 дней при солидной форме опухоли.

Спектральные методы.

Уровни внутриклеточного накопления АД в клетках и в растворе ДНК определяли спектрофлуориметрически по методу, разработанному в нашей лаборатории (Богуш Т.А., Баранов Е.П. "Антибиотики и химиотерапия", 1990 т.35, N11, с.16-18), на флуоресцентном спектрофотометре MPF-4, модель 850 (Hitachi, Япония), в стандартной кварцевой кювете с длиной оптического пути 1 см при длине еолны "возбуждения"- 470 нм и "флуоресценции" - 590 i:m, спектральная ширина щелей составляла 10 нм. Для отсечения рассеянного клетками возбуждающего света при работе с суспензией клеток использовали светофи.7". тр FC-18.

Возможность прямого химического взаимодействия АД с ГК оценивали по влиянию модификатора на спектр АД. Для регистрации спектров поглощения использовали спектрофотометр "Hitachi U-2C00" (Япония) со спектральным разрепение-1 Ihm. Все измерения проводили в кюветах с длиной оптического пути 1 см в интервале длин воли 400 - 600 нм. Точность регистрации оптической плотности (O.D.) была не менее 2 Z.

Статистическая обработка результатов.

Расчет сшибки показателя средней, достоверности различий между значениями проводили с помощью методов параметрической и непараметрической статистики (критерии Фишера-Стьюдента).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1. ВЛИЯНИЕ ГК НА ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ АД.

В работе изучено влияние ГК на острую, хроническую токсичность адриачицина, а также желудочно-кишечную, кардиотоксичность и гематотоксичность. ГК всегда вводили внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг за 10 мин до АД, а также 15 и 40 мин после антибиотика. Таким образом мы пытались поддержать высокую концентрацию ГК во время сохранения в организме максимальной концентрации АД.

Данные, представленные в таблице 1, показывают, что при введении токсичных доз АД 10 к 15 мг/кг, вызывающих гибель от 25 до 752 мышей, ГК полностью защитил животных от летального действия антибиотика. Прл введении АД в дозе ЛДюо 20 мг/кг, снижение острой токсичности антибиотика проявилось в уменьшении количества павших животных и увеличении продолжительности их жизни. Защитный эффект ГК проявился и "при введении дозы АД 25 мг/кг, превышающей ДЦюо: средняя продолжительность жизни животных, получивших АД+ГК, была приблизительно в 2 раза выше, чем"при введении одного антибиотика.

Поскольку в клинической практике А1! применяется не однокра,-но, а многократно особое внимание было обращено на изучение влияния ГК на хроническую токсичность АД." Результаты этих опытов представлены на рис.1, ^за и режим введения модификатора в этих

1 NN опытов АД («г/кг) Са 1) Продолжительность жизни павших мышей (дни) i Количество пгиши | шэей/обнее коли- | честго иштей в | группе |

1 10 + 8,0 i 0,5 - 2/8 0/8 (25Х; |

г 10 + 8.0 ± 1,9 2/8 0/8 (251) |

3 15 + 10,2 ± 1,5 4/3 0/8 (50« 1

4 15 + 9,6 i 0,9 "é/8 0/8 (752) |

1 20 + 8,5 + 0,8 22,3 ± 2,8 " со со ы> ctí (100« | (38« |

2 20 + 11,0 ± 1,0 14,0 t 4,7 " e/e щ (10CZ) | (зах) I

4 25 4.6 ± 0,4 10.6 ± 2,3 " 8/0 7/8 CIOOS) | (88« |

5 25 + 5,0 ± 0,3 12,1 ± 2.5 " 8/8 " 8/8 (100« i (100*) ! 1

taüDCia i. Шляние гдэконата кальция (Са) на остров токсическое действие адриамицша (АД).

1) 200 иг/кг Са во всех экспериментах вводили трехкратно: ва 5 мин до и 15, 30 шщ" после АД. Различия между контрольной И опытной группами статистически достоверны (р<0,05).

экеперимрчтах были выбраны на основании положительных результатов оценки антитоксического действия ГК в опытах по острой токсичности АД. Разовая доза АД 4 мг/кг и релчш длительного введения антибиотика были выбраны, исходя из данных литературы.

Видно, что при введении толисо АД 1007. животных пали со средней продолжительностью жизни около 55 дней. Максимальная доза АД, которую удалось ввести животным в этой группе, сотавила 40 мг/кг. Гибель первой мыши отмечена через 33 дней, при этсм мини-

Рис.!. Влияние глюконата кальция (Са) на хроническую токсичность адриамицина (АД)

Максимальная Латентный Мин хальная

Во: .ействие курсовая период ги- летальная

доза АД бели иише&ъ доза (АД)

(мг/кг) (дни) (иг/ кг)

Са + АД ее ее 52

Однократная доза АД - 4 ыг/кг

Количество выживших животных

малъная доза, при которой отмечается гибель периого животного, сотавляет 16 мг/кг.

При аналогичном хроническом введении АД с ГК средняя, продолжительность жизни павших животных составила 104 дня, т.е: была приблизительно в 2 раза больше, чем при введении одного АД. Мак-симальня доза АД, которую удалось ввести животнь"" вместе с ГК, сотавила 68 мг/кг. Гибель первой мыши отменена только через 86 дней, и минимальная доза АД, введенная с ГК, при которой отмечена гибел*> первого животного, составила 52 мг/кг.

Кроме того в хронических экспериментах проводилось постоян-

ное взвешивание животных. На рис.2 представлено изменение массы тела по отношению к исходной, принятой за 100%, в течение всего эксперимента. Видно, что на все сроки наблюдения масса тела мышей, получавших АД с ГК, была выше, чем у животных, которым вводили только антибиотик. Поскольку по общепринятым представлениям уменьшение массы тела после введения цитостаткка является отражением желудочно-кишечной токсичности, можно говорить о том, что ГК уменьшает хроническую желудочно-кишечную токсичность АД.

При оценке влияния на хроническую кардиотоксичность АД по некоторым электрокардиографическим и физиологическим параметрам работы сердца наблюдалась тенденция к ое улучшению. Например, ГК уменьшал, индуцированные АД, изменения начальной стадии деполяризации желудочков, менее выраженными были ишемические изменения миокарда, снизились проявления тахикардии. Тем не менее, на основании имеющихся данных, мы не можем говорить об уменьшении карди-отоксичности АД при введении ГК. На этом этапе, исследования с уверенностью можно утверждать лишь, что ГК не усилил проявления хронической кардиотоксичности АД.

Влияние ГК на гематотоксичность АД оценивали по количеству лейкоцитов в периферической крови (рис.3). Видно, что антибиотик в дозе 10 мг/кг вызвал умеренную лейкопению на 2-4 сутки после введения препарата, а к 6-ым суткам количество лейкоцитов восстанавливалось полностью. При предварительном введении ГК уменьшение количества лейкоцитов в крови после введения АД на Есе сроки наблюдения было менее выраженным.

Итак, по результатам исследования влияния ГК на токсические проявления АД можно сделать заключение, что ГК снижает сстр/и и хроническую токсичность антибиотика, в том числе желудочно-киш-.ч-

Изменение массы тела в% по сравнению с ис- одной

Дни после первого введения АД

Рис.¿Влияние глюконата кальция (Са) на изменение массы тела мышей при курсовом введении адриамицина (АД).

1 - Контроль 2 - АД 3-АД + Са

Опыт 1 Опыт 2

Рис.5. Влияние глюконата кальция (Са-20и ыг/кг) на количество лейкоцитов в периферическс ": крови после введения. адриамицина (АД-10 иг/кг).

колебания количества лейкоцитоз у контрольных животных

ную и гематотоксичность.

2. ВЛИЯНИЕ ГК НА ЛЕЧЕБНОЕ ДЕЙСТВИЕ АД.

Результаты опытов, выполненных на мышах с гемобластозом Ьа, представлены на рис.4. Видно, что при применении одного АД, его

Доза адриамицина (иг/кг)

Рис. ^ . Лечебное действие адриамицина (1) и адриаыиц" ча

с глюконатом кальция (2) у мьшгей о гемобластозом Ьа.

лечебное действие увеличивается с увеличением дозы от 2,5 до 5 мг/кг, при которой лечебный эффект достигает максимальных значений - около. 707. увеличения продолжительности жизни. Затем, из-за проявления токсичности, лечебный эффект антибиотика при увеличении дозы постоянно уменьшался и при высокотоксичной дозе адриамк-цина 10 мг/кг леченые животные живут меньше контрольных.

С ГК характер кривой при применении нетокйичных доз АД 2,5 -

Б мг/кг остается таким же: лечебное действие увеличивается с увеличением дозы антибиотика. Однако, максимально лечебный эффект АД при дозе 5 мг/кг достигает 110% увеличения продолжительности жизни (по сравнению с 70%, при применении только антибиотика). Эффект сохраняется на этом высоком уровне и при дозе АД 7,5 мг/кг, когда лечение животных одним антибиотиком приводит лишь к незначительному (46%) увеличению продолжительности их жизни из-за выраженной токсичности антибиотика и, наконец, при дальнейшем увеличении дозы АД, примененного с ГК, до 10 мг/кг также отчетливо проявляется антитоксическое действие модификатора, что приводит к реализации заметного лечебного эффекта антибиотика (около 30% увеличения продолжительности жизни), в сравнении с 30% уменьшением продолжительности жизни животных, леченых одним АД, по сравнению с контролем.

Результаты опытов по изучению влияния ГК на лечебное действие АД у мышей с плазмацитомой МОПС-406 представлены па pr^.5. Видно, что при применении одного АД, его лечебное действие увеличивается с увеличением дозы вплоть до 10 мг/кг, при которой лечебный эффект достигает максимальных значений - около 130% увеличения продолжительности жизни. Затем, из-за проявления токсичности, которая пропорциональна дозе АД, лечебный эффект антибиотика при- увеличении дозы постоянно уменьшается и при высокотоксичной дозе 20 мг/кг леченые животные живут ппиблизительно в два раза меньше контрольных.

При применении ГК, характер кривой остается таким же, но, во-первых, проявление токсичности АД начинается только с дозы 15 мг/кг, а, во-вторых, что наиболее вайю, лечебное действие достигает 180% увеличения продолжительности жизни. При этом, в группе

Рис.5 , Лечебное действие адриаиицина (1) и адриамнцина с гяюконатои кальция (2) у мышей с плазмацитомой МОПС-406.

животных, леченных АД с ГК, появляются излеченные животные: 20 и 40% при дозе антибиотика 10 и 15 мг/кг соответственно.

Исследование влияния ГК на лечебное действие АД в отношении резистентных опухолевых клеток выполнено на двух моделях трансплантируемых опухолей: с" исходной резистентностью - рак шег и матки РИМ-5 (солидная) и с индуцированной - лейкоз Р-388.

Во всех экспериментах при введении АД с ГК показатели эффективности антибиотика были аналогичны таковым как у животных, получивших только АД. Это свидетельствунт о том, что ГК не повлиял на эффективность лечения АД резистентной опухоли при этом, однако, что наиболее важно, не увеличил резистентность резистентность опухоли к цитостатику.

Таким образом, применение ГК никак не влияет ча биологическую характеристику опухолевых клеток: чувствительность или резис-

тентность опухоли к АД не изменяется при примене. ии модификатора. В то ке время при применении ГК у мышей с опухолью, так же как и у интактных животных, отмечено снижение токсичности АД, что позволяет ■ увеличить лечебную дозу антибиотика и повысить его эффективность до уровня, не достигаемого при введении противоопухоле-. вого препарата без модификатора.

3. ВЛИЯНИЕ П£ НА ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПОРТ АД.

Для изучения возможного механизма модифицирующего влияния ГК были проведены эксперименты по изучению влияния "модификатора на внутриклеточный уровень АД.

В нашей лаборатории совместно с сотрудниками.Филиала Института Атомной Энергии им.Курчатова разработан принципиально новый метод исследования прижизненного накопления антрациклинов в клетках, позволяющий оценить этот параметр в динамике и что особенно важно для нашей задачи - в одних и тех же клетках оценить внутриклеточный транспорт АД до л после воздействия модификатора.

В основу метода легли данные литературы и собственные наблюдения о том, что взаимодействие АД с ДНК, но не с другими макромолекулами," приводит к тушению флуоресценции антибиотика. Иллюстрация этой посылки представлена на рис.6. Видно, что в диапазоне доз" АД от 1СТ8 до Ю-4 М при концентрации ДНК в "\створе 5х10~б М отмечается дозово-зависимое тушение флуоресценции антибиотика. В живых клетках этот процесс развивается в течение инкубации их с антрациклином и количественно отражает внутриклеточное содержание антибиотика. Ми использовали этот подход для оценки внутриклеточного накопления АД в клетках нормального эмбрионального эпителия печени крыс и эпителия кишечника человека.

Тушение флуоресценции АД {"/,у. исходному)

Ряс. 6. Изменение интенсивности флуоресценции вдриа- мицина (АД) в растворе ДНК в зависимости от концентрации антибиотика.

Предце всего, оценивая кинетические кривые внутриклеточного накопления разных концентраций АД в суспензии клеток, можно заключить, что использованные клетки высоко чувствительные к действию АД, что совпадает с представлением о гепатотоксичности и желудочно-кишечной токсичности актрациклинов как в опытах на живо. ных, так и у онкологических больных. В пользу, этого свидетельствует тот факт, что при обеих концентрациях антибиотика, в обоих типах клеток за 60 мин инкубации флуоресценция АД падает более чем на 50% (рис.7, кривые 1). Иными словами можно сказать, что более 50% добавленного антибиотика входит внутрь клеток и взаимодействует с ДНК. Такой уровень внутриклеточного, транспорта АД характерен для чувствительных к нему клеток, тогда как клетки резистентных клеточных культур в аналогичных условиях обычно включают не более 30£ антибиотика.

Рис.7. Влияние глюконата кальция (Са) на инт нсивность флуоресценции адриамицина (Л) при инкубации с гепатоциТаыи (А) и с клзткаыи эпителия кишечника человека (Б).

Флуоресценция.АД исходной/; Слуоресценщи АД исходному)

1- АД (5x10 М)

2-АД (5х10_Т М)+Св (10 и)

»р«ых (ихх)

1- АД (6x10 "и).

г- АД (6x10 7М)+Са (10*^ М)

При добавлении ГК к суспензии гепатоцигов (рис.7А), в которых внутриклеточное накопление ДЦ достигло стационарного уровня к 35-45 мин (кривая 1) отмечено "возгорание" флуоресценции АД, которое увеличивалось во времени и выходило на плато за 5-10 мин инкубации (кривая 2). В пересчете относительно уровня флуоресценции АД, принятого за 100%, при котором ГК был добавлен к клеткам, это "возгорание" флуоресценции составляет около 20%. Иными словами; при добавлении ГК, часть АД переходит в свободное, не связанное с ДНК, состояние.

На рис.7Б показан характер изменения кинетической кривой при добавлении ГК к суспензии клеток эпителия кишечника человека. В момент, когда внутриклеточное накопление АД достигло стационарного уровня (кривая 1), отмечено аналогичное "возгорание" флуоресценции АД, которое составило около 30% (кривая 2).

Обсуждая возможные причини уменьшения внутриклеточного содержания АД при добавлен...1 ГК, можно высказать по крайней мере два возможных объяснения наблюдаемого эффекта. Во-первых, это может быть связано с нарушением комплекса АД с ДНК.Во-вторых - спектральным феноменом,отражающие химическое взаимодействие АД с ГК.

Результаты оценки возможности химического взаимодействия АД с ■ ГК приведены на рис.8. Вилно, что в диапазоне исследованных

АД - 5х1СГ°М Са - 5х10~2 М

АД - 2,5x1 Са - 5x10 ^М

АД + Са

Рис. & . Влияние глюконата кальция (Са) на спектральные характеристики адриаыицина (АД).

длин волн (от 400 до 600 нм) при обеих исследованных, концентре циях антибиотика ГК не повлиял на спектр поглощения АД: ни высота, ни местоположение пиков АД на спектре не изменялись при добавлении модификатора.

Таким образом, в прямых экспериментах, при оценке спектральных характеристик АД, химического взаимодействия антибиотика с ГК выявлено не было.

Исследование возможности"нарушения ГК комплекса АД с ДНК было проведено в серии модельных экспериментов, выполненных в растворе ДНК. Результаты этих" опытов представлены в таблице 2. Видно,

1------1 - - - | NN |Концент- т--- ¡Концен- Уменьшение флуоресценции АЛ Уменьшение свя-1

|опы-|радоя трация в растворе ДНК (в * к не*.) зываиия с ДНК |

|тов |ЯНК (и) |Са (и) Без добавле- После добавле- АД после добав-1

1 1 1 ния Са ния Са ления Са 1

1 " 1 1 1 ! В3.7 75,5 13,2 1

1 1 |5 ЧО-3 ВО, 6 81,3 3,3 1

1 1 1 10"г 82,7 67,3 15,4 1

1 1 |5 -10"3 ■80,7 70,г 10,5 1

1 1 1 10"* 83,5 67.4 16,1 1

1 1 15 -1СГ3 81.4 70,4 11,0 1

1 1 ! Ю"г 26,3 17,0 9,3 |

1 1 |5 -Ю-3 22,7 11,8 10,в | . , _ .... J

Таблица 2. Влияние глвконата кальция (Са) на связывание адриамицина " (АД - 5 -10"7 М) с дак.

" - уменьшение флуоресценции адриаыицина в растворе ДНК без добавления Са расчитывалось в I по отношение! к исходной флуоресценции антибиотика в физиологической растворе, принятой за 1002

уменыеиие флуоресценции адриэыицина в растворе ДНК при добавлении С^ расчитывалась в г по отношение к стационарному уровшо флуоресценции АД в растворе ДНК

что при всех использованных концентрациях ДНК, антибиотика и модификатора тушение флуоресценции АД при добавлении ГК уменьшалось от 10 до.15%. Таким образом, в присутствиии ГК часть связанного с ДНК антрацмклина может переходить в свободное состояние.

Анализируя представленные данные, можно заключить, что ГК способен нарушить взаимодействие АД с ДНК. Это может являться причиной описанного нами "возгорания" флуоресценции антрациклина при его инкубации с чувствительными нормальными клетками после добавления ГК. А это, в свою очередь, мажет быть одной из причин антитоксического действия ГК, так как взаимодействие с ДНК объясняет многие биологические эффекты антрациклинов. в том числе и их токсические проявления.

1. Глюконат кальция проявляет выраженное защитное действие в отношении острой токсичности адриамицина, существенно уменьшая летальный эффект антибиотика, проявление желудочно-кишечной токсичности и гематотоксичности.

2. Глоконат кальция проявляет выраженное защитное дейетвче в отношении хронической токсичности адриамицина, существенно уменьшая летальный эффект и проявления желудочно-кишечной токсичности.

3. Глоконат кальция не влияет на специфическую активность адриамицина в отношении опухолей, чувствительных и резистентных к действию антибиотика.

4. Применение глюконата кальция позволяет за счет снижения токсичности адриамицина увеличить лечебную дозу антибиотика и как результат - существенно повысить его лечебное действие в отношении чувствительных к антрациюшнам опухолей.-

5. Глюконат кальция уменьшает внутриклеточное накопление адриамицина в нормальных клетках, чувствительных к токсичности антибиотика.

6. Химического взаимодействия глюконата кальция с адриамигр-ном не выявлено.

7. Гдоконат калымя способен нарушать Езаимодействи" А," о

1. Влияние глюконата кальция на токсичность и лечебное действие адриамицина. Доклад на Московском отделении 1 Всесоюзного биохимического общества АН СССР, 1989 (соавт.: Т.А.Богуш, Н.В.Сквабчэнкова).

2. Снижение токсичности и повышение эффективности адриамицина при применении глюконата кальция. Тез.доклада на 1 Конференции- конкурсе НИИ ЭДиТО ОНЦ РАМН "Терапия, диагностика и профилактика опухолей в эксперименте, Москва, 1990, с.76-80, (3-я премия), (соавт.: Т.А.Богуш, А.Локшин).

3. Уменьшение побочных осложнений противоопухолевых препаратов - путь к повышению эффективности лечения злокачественных опухолей. Тез.доклада на 1 Российском Национальном Конгрессе "Человек и лека^тво"," Москва, 1992, N259, (соавт.: A.B.Сыркин, Т.А.Богуш).

4. Снижение побочных осложнений противоопухолевых препаратов. Тез.доклада на I Российском На зональном Конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 1992, N 334, (соавт.: Т.А.Богуш, А.Б.Сыркин) .