Принципы использования пцр диагностики вич. Пцр на вич, для чего нужен этот анализ Ограничения пцр при исследовании вич

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК. ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов.

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения.

ПЦР в реальном времени

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР.

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.

Взятие материала для диагностики ВИЧ

Забор биологического материала для проведения диагностики ВИЧ с помощью ПЦР проводится согласно определенным стандартам. Манипуляция проводится в процедурном кабинете. Используются одноразовые стерильные инструменты. Вскрытие пакета с инструментами проводится непосредственно возле пациента. Собранный материал помещается в стерильные пробирки, предварительно обработанные CrO3 (хромовая смесь). В качестве биологического материала выступает венозная кровь, которая сдается в утреннее время и на голодный желудок. За несколько дней до сдачи анализа следует исключить употребление алкоголя, жирной и острой пищи, прекратить прием медикаментозных препаратов.

Если отменить лекарственные средства невозможно, об этом следует сообщить до проведения анализа.

Дополнительно может быть взят мазок из уретры и влагалища, для выявления сопутствующих заболеваний, передающихся половым путем. Исследование проводится анонимно, результаты пациент получает лично в руки. При себе рекомендуется иметь удостоверение личности.

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа?

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа.

Проведение полимеразной реакции у новорожденного

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа. При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА?

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР - не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

• Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
• Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых.
• Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови.

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул - выдается положительное диагностическое заключение. В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный - тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.

Методами ИФА и ПЦР диагностируется ряд заболеваний, которые передаются половым путем.

При подготовке к обследованию пациентам в течение двух дней нежелательно употреблять жирную еду. Как и анализ крови на вирусы, пробы берутся натощак, последний прием пищи был не позднее 8 часов назад. Исключить из рациона жареное и алкоголь. Соблюдая эти несложные требования, вы приближаете результаты своих обследований к более точным.

В список выявляемых заболеваний входят:

• вирус папилломы человека (ВПЧ);
• хламидии;
• герпес (дополнительно назначается анализ крови на герпес);
• уреаплазма;
• микоплазма;
• гонорея;
• цитомегаловирус;
• трихомониаз;
• токсоплазмоз.

ПЦР на ВИЧ в диагностике на инфекции

В связи с тем, что нет известных симптомов, характерных исключительно для ВИЧ-инфекции, основываясь лишь на жалобах обратившегося пациента, произвести распознавание ВИЧ-инфекции не представляется возможным.

Тестирование на ВИЧ стало необходимостью, т.к. современное мнение общества об этой болезни сводится к тому, что СПИД считают смертельным приговором. Встречались такие случаи, что после нерегулярных сексуальных контактов человек уделяет повышенное внимание сигналам своего организма, находя, а зачастую придумывая все новые признаки смертельной болезни.

Проведение исследования в лабораторных условиях на сегодняшний момент единственный и самый надежный вариант диагностики (анализ крови на ВИЧ). Используют ПЦР для определения следующих проблем со здоровьем:

• для подтверждения или опровержения наличия ВИЧ в период серонегативного окна;
• при сомнительном результате иммуноблота (чтобы установить точное описание патологического процесса);
• при установлении генотипа ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
• для установления и наблюдения за вирусной загруженностью организма;
• для выявления ВИЧ-статуса у новорожденных детей, матери которых являются носителями ВИЧ;
• при переливании крови.

Превосходство метода ПЦР при диагностировании инфекционных заболеваний:

При установлении у обратившегося за медицинской помощью пациента утвердительного результата на ВИЧ-инфекции начинают проводить более глубокие исследования больного для выяснения и уточнения характера заболевания и его течения, а также основания и характера вторичных болезней, уровня поражения иммунитета.

Анализы ИФА и ПЦР: особенности исследования, принципы и расшифровка

Кровь для проведения анализа берется из вены. В период беременности заборы крови на СПИД производятся в неукоснительном порядке. Выводы об отсутствии или присутствии в организме больного вируса иммунодефицита производятся по результатам наличия или отсутствия антител. ИФА нужно производить не сразу после подозрения на заражение, а спустя некоторое время, чтобы в крови пациента образовались антитела. Проходит по разным причинам от 3 недель до 3 месяцев.

Кроме того, выявлено, что результат ИФА может быть и ложноположительным и ложноотрицательным. При очень ранней диагностике на предполагаемую инфекцию, когда антитела к ВИЧ еще не появились, получается ложноотрицательный результат. В таких случаях для уточнения нужно пересдать кровь на ВИЧ по прошествии 1-3 месяцев.

Ложноположительный итог, напротив, может быть получен в случае, когда у обратившегося пациента есть хронические инфекции, онкологические болезни, аутоиммунные заболевания, кроме перечисленных возможны отклонения от нормы и в других ситуациях. Поэтому при утвердительном результате ИФА его непременно перепроверяют наиболее восприимчивыми способами.

ПЦР диагностика входит в ряды нынешних наиболее высокотехнологичных способов проведения исследований, достаточно часто используется при выявлении инфекционных заболеваний. Диагностирование ДНК вобрало в себя несколько различных способов проведения исследований, в большей степени популярен сегодня метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР.

В основе этого метода лежит нахождение в тканях для микроисследования малой части ДНК возбудителя данной инфекции. При этом малая часть ДНК заключает в себе пары ДНК количеством до нескольких сотен, которые находятся в строгом порядке.

Метод ПЦР является наиболее точным, с его помощью возможно определение наличия вируса вне зависимости от того, появились антитела или нет. Но, несмотря на свою точность, метод имеет один серьезнейший недостаток, который как раз и вызван его повышенной точностью. Существует достаточно высокая вероятность, что результат окажется ложным. Поэтому в связи с этим методом и в дополнение к нему применяют иные способы для обнаружения генного и антигенного материалов.

Сущность диагностики гепатитов при помощи ПЦР

Существует пять доказанных вирусов, вызывающих болезни печени. Это известные вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Очень редкими являются случаи, когда гепатит вызывается вирусом Эпштейна-Барр, который на деле является разновидностью герпеса. Перечисленные вирусы являются представителями разных семейств, что отражается на их лечении в зависимости от вида гепатита.

Способ лечения болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека, не найден до сих пор. Зато диагностика достигла серьезных успехов. Анализ на ВИЧ, выполненный методом ПЦР, – один из вариантов выявления вируса в организме.

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – один из современных методов диагностики ВИЧ. В его основе лежит способность нуклеиновых кислот к саморепродукции. Клетка любого живого организма включает белок и нуклеиновые кислоты:

• РНК- рибонуклеиновую,
• ДНК- дезоксирибонуклеиновую.

Эти макромолекулы хранят генетический код. Если концентрация вирусных клеток в крови низкая, в пробе содержатся не целые цепочки ДНК, а их отдельные «кирпичики» – нуклеотиды. Полимеразная цепная реакция выявляет даже такие «обломки» вирусных клеток. Этот позволяет получить результат на ранних сроках после возможного заражения, когда клинические первые симптомы еще не появились.

Наиболее точный результат можно получить, используя для анализа венозную кровь. Перед тем как пройти обследование, за пару дней . За 2 недели прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.

Пробу биоматериала расщепляют в медицинском лабораторном реакторе. Затем фракции обрабатывают ферментами. Реактивы объединяются с ДНК вирусной молекулы и дублируют ее. Из одной клетки получается 2, из 2-х – 4, далее 8. Число растет в геометрической прогрессии. Цепная реакция позволяет в короткий срок увеличить количество вирусного компонента и сделать его заметным для лаборантов.

Нормой является отрицательный результат анализа, который выглядит так: «ДНК вируса не обнаружено». Это и есть референсное (среднестатистическое) значение.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР имеет неоспоримые преимущества, но есть и существенные недостатки. К первым относятся:

• Высокая точность. Крайне мала вероятность получить ложноотрицательные результаты.
• Универсальность. Для исследования подходит не только кровь, но и другие биологические жидкости (влагалищные выделения, сперма). Слюна, моча также используются, но точность результата будет ниже. В этих средах концентрация вирусных клеток незначительна.
• Широкий спектр анализа. Один образец биоматериала можно исследовать на несколько заболеваний.
• Скорость выполнения. Полимеразная цепная реакция относится к срочным методам диагностики. Ответ можно узнать уже на следующий день.
• Достоверность составляет 80 %. С помощью метода ПЦР можно обнаружить вирусные частицы, даже если их концентрация невелика. Это позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях и своевременно начинать терапию.
• Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. Время, когда ВИЧ обнаруживают в крови при помощи ПЦР, – 10-14 дней после предполагаемого заражения. Это стандартный отрезок для диагностики вируса иммунодефицита. на этом этапе еще не обнаруживаются; метод ИФА не работает.
• Нет возрастных ограничений. Можно проводить это тестирование ребенку с момента рождения.

Недостатки метода ПЦР при диагностике ВИЧ:

• Более высокая стоимость в сравнении с иммуноферментным анализом 3 поколения.
• Требуется сложное медицинское оборудование.
• Погрешность 20% в связи с высокой чувствительностью реакции. При аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, хронических инфекциях ПЦР может дать ложноположительный результат.

Кому проводится ПЦР

• Нужен ранний ответ для предварительного диагностирования. ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть результаты ИФА.
• Иммуноблоттинг дал положительный результат. Если первым проводится ПЦР анализ, то обязательно подтверждение результата методом иммунного блоттинга. Исследования дополняют друг друга. Используя сразу 2 метода, медики исключают возможность ошибок.
• Когда позитивный подтвержден, ПЦР помогает отследить эффективность проводимой терапии.
• Используется для исследования донорской крови на наличие .
• Проводить ПЦР можно даже детям до года. Этот метод применяется, чтобы выяснить ВИЧ-статус новорожденных, мамы которых являются носительницами вируса. Тест, проведенный в первые дни жизни, покажет, произошло ли внутриутробное инфицирование. Заражение могло случиться, когда ребенок проходил по родовым путям. , приобретенный младенцем в процессе родов, удастся выявить через 2 – 3 недели.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ и расшифровка результатов не требуют много времени. Забор крови занимает 5-7 минут. В стандартном случае лаборанту достаточно 24 часов, чтобы подготовить справку. Диагностирование занимает не более 8 часов, остальное время требуется на оформление. Пациент получает отчет на следующий рабочий день. выполняют в течение 2 часов.

Исследования на ВИЧ указанным способом не проводят по полису ОМС. Получить эту услугу бесплатно в государственной поликлинике нельзя. Зато практически все коммерческие лаборатории обычно имеют необходимое оборудование и реагенты. Проведение анализа ПЦР часто входит в общий скрининг на ВИЧ. Цена комплексной диагностики составляет от 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можно анонимно. В регистратуре пациенту дают индивидуальный номер, по которому он узнает результат. Современные медицинские центры отображают все данные на своем сайте в личном кабинете клиента.

ПЦР - это один из основных методов диагностики инфекционных заболеваний. Применяется он и при определении ВИЧ инфекции.

Используется ПЦР для различных целей.

Это может быть:

• первичная диагностика инфекционного заболевания;
• оценка прогноза;
• определение вирусной нагрузки;
• подбор лечения;
• определение резистентности к антиретровирусным препаратам.

В ходе реакции ПЦР выявляют РНК вируса или ДНК провируса из клеток крови. Точность исследования достаточно высокая.

Наибольшая точность у метода, предполагающего обнаружение ДНК. Он позволяет выявить провирус при его концентрации от 1 до 5 копий ДНК на 1 миллион клеток. Исследование обладает высокой специфичностью. Она достигает 97%. Причем, если обнаруживается высокая вирусная нагрузка, то специфичность теста достигает 100%.

Ложноположительные результаты всегда дают низкий уровень вирусной нагрузки. Поэтому при обнаружении такого результата может потребоваться повторное определение ДНК провируса.

ПЦР имеет ограниченное применение. Этот анализ используется чаще всего не для первичной диагностики инфекции, а уже в процессе лечения. Тогда как первичная диагностика проводится с помощью серологических исследований. Это анализы, при которых в крови определяется уровень антител к ВИЧ. Они стоят гораздо дешевле.

ПЦР обходится пациенту в частных лабораториях в сумму 150-200 долларов США. Тем не менее, иногда этот способ бывает необходимым и при первичной диагностике инфекции. Он раньше всего становится информативным. С помощью анализа можно диагностировать ВИЧ уже в острый период. В это время человек страдает от повышенной температуры тела, боли в мышцах и суставах, тошноты высыпаний на коже и других симптомов. Хотя иногда они отсутствуют.

Острый период наступает сразу после инфекционного. В это время антитела методом ИФА еще могут не определяться. А ПЦР уже становится положительной. Однако оснований для назначения данного исследования при возникновении у больного ранних симптомов ВИЧ обычно не возникает. Потому что эти симптомы неспецифичны.

Человек просто идет к терапевту и лечится от острой респираторной вирусной инфекции.

Только если у него есть основания считать, что он заражен ВИЧ-инфекцией, может проводиться первичная диагностика методом ПЦР. Например, если человек имел половые контакты с ВИЧ-положительным партнером. А впоследствии у него проявились симптомы, вызывающие подозрение на инфицирование. Тогда ПЦР даст возможность раньше выявить заболевание и получить своевременную терапию. Ему будут назначены антиретровирусные препараты, которые блокируют размножение вируса и предотвращают нарушения иммунитета.

Антитела становятся положительными только в латентный период. Определение ДНК провируса может быть качественным или количественным. Качественный анализ означает, что результат выдается положительный или отрицательный. Вирусная нагрузка не определяется.

В диагностике ВИЧ вирусная нагрузка имеет большое прогностическое значение. Поэтому чаще используется количественный тест. ПЦР таким образом помогает выяснить, насколько много вирусов содержится в крови пациента. Исходя из этого, планируется необходимый объем терапевтических мероприятий.

Тест ПЦР ультрачувствительный. Он почти не дает ложноотрицательных анализов. Потому что благодаря ПЦР можно выявлять даже минимальные концентрации вируса в организме.

Этот метод часто используется для первичной диагностики ВИЧ инфекции у детей, которые рождены от больных матерей.

Анализ на антитела в детском возрасте не информативен. Потому что в их крови могут циркулировать антитела матери. Их наличие не говорит о том, что ребенок болен. Поэтому в первые 2 месяца жизни малыш должен сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР. Через несколько месяцев его проводят повторно. Если оба анализа отрицательные, нет оснований полагать, что у ребенка инфекция. Скорее всего, он здоров. Но кормить грудью его нельзя. Потому что вирус передается через грудное молоко.

В возрасте 1 год при отрицательных результатах анализов ребенка снимают с учета. Показанием для обследования детей может быть только их рождение от ВИЧ-позитивных матерей. Потому что симптомов инфекции у них нет до возраста 5 лет и более. Очень редко клинические признаки появляются раньше.

В среднем риск передачи ВИЧ от матери к ребенку, если она больна, составляет 30%. Антитела в детском организме к этому возбудителю могут обнаруживаться в течение первых полутора лет жизни. К этому времени ребенок серопозитивный всегда, независимо от наличия у него заболевания. После 2 лет жизни диагностика может проводиться с помощью анализа крови на антитела.

Анализ нет смысла сдавать в первые дни жизни ребенка. Потому что в это время возможны ложноотрицательные результаты. Только у одного ребенка из трех в этот период может быть выявлено ДНК провируса в случае, если малыш инфицирован. А вот спустя месяц чувствительность теста достигает 93%.

Это меньше, чем у взрослых. Именно по этой причине требуется двукратное проведение теста с разрывом в 1-2 месяца. Проведение химиопрофилактики ВИЧ не снижает диагностической ценности исследования, что является одним из его преимуществ.

Помимо ДНК провируса, определяется также РНК вируса иммунодефицита человека. Это исследование проводится в основном не для первичной диагностики. Оно назначается пациентам с уже диагностированным заболеванием. Основная цель - это мониторинг эффективности терапии и прогноз патологии. Для определения РНК - это ранний маркер результативности лечения.

С помощью этого метода:

• решается вопрос о назначении антиретровирусной терапии;
• оценивается, насколько эффективным является проводимое лечение;
• проводится мониторинг клинического течения инфекции;
• у беременных с помощью данного теста на месяц до родов определяется риск передачи ВИЧ ребенку, соответственно, оценивается целесообразность кесарева сечения.

Кроме того, с помощью ПЦР тестируют донорскую кровь. Данный метод диагностики указан в соответствующем приказе РФ от 2008 года.

Разные тест-системы выявляют вирус в разных концентрациях. Минимальный порог отличается. Он может быть от 20 копий в мл, тогда как другие системы определяют только от 150 копий в мл.

Вместе с исследованием на РНК вируса иммунодефицита может быть проведена оценка чувствительности к антиретровирусным препаратам. Это возможно только в случае, если вирус определяется в количестве более 1 тысячи копий в мл.

Оценивается чувствительность к таким препаратам:

• ингибиторам протеазы;
• ненуклеозидным или нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы.

Показания к исследованию:

• снижение эффективности проводимой терапии, если нет других видимых причин уменьшения эффекта от препаратов;
• острый период инфекции, до начала антиретровирусной терапии, если точно известно, что человек инфицирован от партнера, у которого лечение стало неэффективным (имеет место резистентность к препаратам).

Резистентность к антиретровирусной терапии может быть первичной или вторичной.

• Первичная - это когда человек изначально заражен устойчивым вирусом.
• Вторичная развивается в случае, когда человек неправильно лечился.

Например, не вовремя получал препараты, делал перерывы в лечении, получал неадекватные дозы и т.д.

Признаки резистентности:

• РНК вируса иммунодефицита не снижается в течение 6 недель лечения;
• рецидив заболевания (обнаружение высокой концентрации РНК на фоне непрекращающейся терапии, если ранее была достигнута супрессия).

При этом важно исключить другие возможные причины прогрессирования болезни, за исключением резистентности. Нужно убедиться, что лечение действительно было непрерывным. То есть, что больной не игнорировал рекомендации врача и не прекращал лечение. А также что он не имеет заболеваний, при которых может нарушиться усвоение лекарственного препарата в желудочно-кишечном тракте.

Определение резистентности к антиретровирусным лекарствам дает возможность пересмотреть схему терапии. В неё включают те препараты, к которым вирус чувствительный.

Такое лечение не приводит к полному излечению ВИЧ, но:

• продлевает жизнь;
• сохраняет трудоспособность пациента;
• уменьшает риск передачи инфекции;
• нормализует состояние иммунитета.

Через сколько можно

Часто пациенты спрашивают, через сколько времени можно делать анализ методом ПЦР на ВИЧ. Это исследование проводится гораздо раньше, чем ИФА. Патологию можно выявить в остром периоде, а иногда и в инкубационном периоде. Сдавать анализ можно через 2-4 недели. В то время как кровь на антитела сдают не раньше, чем через 6 недель.

ПЦР на ВИЧ может быть положительным уже спустя 14-21 день после возможного инфицирования.

Но если анализ отрицательный, это не гарантирует отсутствие инфекции.

Лучше провести подтверждающий тест медом ИФА через несколько недель. А вот если ПЦР положительный, то очень мало шансов, что результаты анализа неправильные. Сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР можно в нашей клинике.

Наши преимущества:

• нет очередей - сдача анализов по записи на определенное время;
• быстрые сроки выполнения анализов;
• возможность анонимного исследования;
• никому кроме вас мы не сообщим результаты анализов.

У нас используются самые современные методы диагностики, включая определение РНК вируса или ДНК провируса. При необходимости можно оценить результаты терапии и провести оценку резистентности ВИЧ к лечению антиретровирусными препаратами. Результаты вы получите через несколько дней.

Согласно статистике ВОЗ, за 40 последних лет 25 млн человек умерли от СПИДа. Урон от этой инфекции колоссален. Больше всего зараженных оказалось в странах Африки, откуда и пошла эта инфекция. При ВИЧ становится особо актуальной диагностика заболевания. Правда, средств для лечения ВИЧ еще не создано, но рано начатая терапия может удлинить срок жизни пациента и улучшить ее качество.

Диагностика инфекции ВИЧ

ВИЧ-инфекция определяется на разных этапах следующими методами:

• ИФА - иммуноферментный анализ.
• Вестерн-блот.
• ПЦР - полимеразная цепная реакция.
• Экспресс-тесты.

Метод ПЦР был разработан американским биохимиком Кэри Муллисом, который получил за это в 1983 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод в медицине при диагностике всех инфекций считается ведущим в силу своей точности и информативности. ВИЧ в этом плане не исключение.

Суть анализа

Любая живая клетка содержит РНК и ДНК. Эти нуклеиновые кислоты способны к самокопированию и самовоспроизведению. Для каждой инфекции фрагменты ДНК уникальны. В биологических жидкостях эти обломки нуклеиновых кислот циркулируют. Они улавливаются и распознаются специальной аппаратурой - реактором. Это и есть основа метода. Лаборант ведет подсчет этих фрагментов. У ретровируса ВИЧ отслеживают РНК. Даже при единичных копиях вирусных частиц ПЦР может их обнаружить и посчитать.

В качестве исследуемой жидкости чаще всего используется венозная кровь. Специальные компоненты метода вступают в связь с частицами вируса и делают их определяемыми, потому что происходит многократное увеличение найденных фрагментов.

В случае с ВИЧ результат наличия вируса можно получить задолго до того, как появится клиника. Поэтому в силу своей высокой чувствительности ПЦР имеет такое высокое диагностическое значение. Огромный плюс ПЦР заключается в универсальности метода. Инкубационный период инфекции для ПЦР не преграда.

Стоимость исследования

Метод ПЦР - достаточно дорогой. В этом заключается один из его больших минусов. Для его проведения нужна новейшая аппаратура и высокая квалификация врача-лаборанта. В силу сказанного ПЦР-диагностика не выполняется в небольших населенных пунктах. Сдать анализ можно только в специализированных крупных клиниках.

Стоимость определения ДНК ВИЧ в клиниках Москвы от 2 800 рублей, выяснение с помощью ПЦР вирусной нагрузки (РНК вируса в плазме) - от 8 800 рублей, а резистентности ВИЧ к ингибиторам протеазы - от 16 500 рублей. Как видим, цены достаточно высокие. ПЦР можно провести бесплатно в государственных поликлиниках по полису ОМС. Важно, что процедуру можно сделать анонимно. В регистратуре пациент получает номер, по которому он сможет узнать результат. В современных медцентрах имеются личные кабинеты клиентов, куда эти данные будут внесены.

Цели исследования

ПЦР-диагностику на ВИЧ назначают в таких случаях:

• Выявление инфекции у ребенка, рожденного от больной матери или носительницы, чтобы определить внутриутробное инфицирование.
• Если ИФА дал сомнительные результаты (ПЦР на ВИЧ помогает в этом случае поставить окончательный диагноз).
• Для выявления количественного содержания вируса в организме.
• При положительном иммуноблотинге - они с ПЦР дополняют друг друга.
• Тестирование доноров.
• Для ранней диагностики ВИЧ.
• Для определения эффективности и резистентности к АРВТ.

Преимущество указанного анализа и в том, что ПЦР на ВИЧ можно проводить даже детям до года.

Исследование чаще выполняют не для первичной диагностики, а уже в процессе лечения. Первичная диагностика - это серологические исследования (при них определяют уровень антител к ВИЧ). При ложноположительном результате его повторяют - это может быть при низкой вирусной нагрузке.

ПЦР диагностирует ВИЧ, когда еще нет к нему антител. Метод ИФА в этом случае не даст ответа.

А ПЦР на ВИЧ будет уже положительным. Но симптомы данного периода ВИЧ неспецифичны. Пациент сначала долго и безуспешно лечится по поводу ОРВИ у терапевта. Следует иметь в виду, что диагноз ВИЧ только на основании ПЦР не ставится, необходимо прохождение и других комплексных тестов. Метод ПЦР служит чаще вспомогательным для сложных случаев.

Подготовка к анализу

Перед тем как сдать ПЦР на ВИЧ, за 2 дня до анализа нужно не употреблять жирную пищу, алкоголь. Также лучше психически и физически не напрягаться. Если пациенту назначен курс иммуностимуляции, его прекращают за 2 недели до анализа.

Кровь лучше сдавать в утренние часы. Исследовать можно и другие биологические жидкости организма (сперму, секрет вагины), но лучшим материалом является кровь. Слюну, пот, мочу и слезы не используют, так как содержание вируса в них минимально.

Плюсы ПЦР при ВИЧ

Достоинствами метода являются крайне малая вероятность ложноположительного результата, универсальность реакции для любых биологических жидкостей организма. Анализ имеет широкий спектр:

• Один забор крови можно использовать для выявления разных инфекций.
• Методика относится к срочным, результат бывает готов уже на следующий день.
• Достоверность составляет от 85 до 98%.
• Наличие ВИЧ можно определить через 10-14 дней после заражения (антител при этом сроке еще нет).
• Нет возрастных ограничений, проводить можно сразу с момента рождения.

Минусы метода

Недостатки ПЦР заключаются в следующем:

• Дороговизна анализа.
• Необходимо сложное медицинское оборудование.
• Требуется высокая квалификация лаборанта и врача, берущего анализ.
• Реакция высокочувствительна, поэтому погрешность может составить 20%.
• Может получиться ложноположительный результат, если у пациента есть аутоиммунные процессы, онкология, хронические инфекции.
• Необходима особая чистота помещения лаборатории, потому что вирус может попасть в анализ из воздуха. Тогда результат будет неправильным.

Для лабораторий, в которых проводится ПЦР, для улучшения качества диагностики разработаны специальные жесткие меры по системе СанПиНа на внутренний контроль. Кроме того, должны быть соблюдены все правила работы при такой методике:

• Требуется строго следить на информацией на пробирках.
• Перед забором крови вновь посмотреть и удостовериться в назначении анализа.
• Медсестра должна сделать правильную маркировку пробирок.
• Врач-лаборант должен правильно провести все манипуляции с биоматериалом, чтобы не допустить перекрестное загрязнение.
• Тест-система должна быть отличного качества.

Только при соблюдении всех этих условий погрешность в ответе может составить всего около 2% эпизодов.

Длительность анализа

Многие интересуются, через сколько ПЦР на ВИЧ будет готов. Диагностирование длится не больше 8 часов. Ответ пациент может получить уже на следующий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Достоверность ПЦР

Несмотря на массу преимуществ, ПЦР не считается идеальным методом диагностирования. К нему обращаются в случае необходимости получения скрининговых тестов на наличие ВИЧ в организме.

Когда берут кровь на анализ?

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ? Достоверный результат можно получить уже при взятии крови через 4-4 дней после предполагаемого инфицирования. Через 2 недели достоверность на ВИЧ составит 98%, а при сроке 5 дней - 80%. Наличие при ПЦР на результата будет достоверным, но для абсолютно точного результата проводят и ИФА.

Анализ ИФА будет результативным только при наличии антител к вирусу, это время может занимать от 1-3 месяцев до полугода. Так как ИФА дает вероятность выше (98%-99,9%), ПЦР нельзя назвать 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции. Но зато это единственная методика, при которой не нужно ждать появления антител.

При ВИЧ методом ПЦР можно получить сведения об эффективности АРВТ, о стадии заболевания ВИЧ и количестве ВН (количественная оценка нахождения ВИЧ в организме). Это будет говорить о тяжести и степени изменений.

Сдать анализы на ПЦР при ВИЧ нужно и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не указывает на достоверность ВИЧ-инфицирования клинически.

Сдают анализ не только при заражении и случайной половой связи. Другие поводы:

• Планирование беременности.
• Предстоящая операция.
• Случайная половая связь.
• Некоторые профессии требуют сдачи этого анализа для допуска на работу (педагоги, врачи и другой медицинский персонал).
• Заключенные.
• Больные ТБ.
• Работники МЧС и полиции.
• Вернувшиеся после отпуска из экзотических стран (при желании удостовериться, что нет инфицирования).
• Проститутки.
• Иностранные студенты.
• Наркоманы.

Также к сдаче анализа на ВИЧ может вынудить определенная симптоматика у пациента:

• Резкая потеря веса.
• Диарея, длящаяся больше 3 недель.
• Беспричинное повышение температуры в течение длительного времени.
• Увеличение лимфоузлов.
• Невыясненная причина пневмонии, кандидоза и пр.

Расшифровка анализа - прерогатива лечащего врача, а не лаборанта.

ПЦР или ИФА, что лучше?

При РНК вируса выявляется и качественно, и количественно. Этот анализ четко идентифицирует конкретный патоген даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. Биологический материал можно использовать даже в засохшем виде. Минус же в высокой чувствительности ПЦР, когда ложноположительный результат может дать и присутствие на инструментах или пробирке даже мизерного количества постороннего ДНК.

Задача и возможность ИФА - определение наличия антител к ретровирусу. Хотя его точность 99%, на ранних стадиях он неприменим.

Качественный анализ на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ определяет присутствие вируса в организме. Результаты в этом случае будут выглядеть следующим образом: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но данное исследование не даст сведений о количестве ретровируса. Такой качественный анализ нецелесообразен тогда, когда уже выявлена ВИЧ-инфекция в организме другими способами.

Контролировать результативность лечения качественным ПЦР невозможно.

Количественный анализ на ВИЧ

Проводится уже только ВИЧ-инфицированным с целью подсчета количества копий РНК вируса в биопрепарате.

Цель такого исследования - мониторинг проводимого лечения и выявление резистентности вируса к нему. Противовирусная терапия в таких вычислениях не назначается врачом вслепую, поэтому будет являться более эффективной. Количественный ПЦР на ВИЧ-инфекцию делают гораздо чаще. Отображается этот анализ копией/мл крови.

Какие результаты могут быть выданы:

• РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл). Нет достоверности диагноза.
• От 20 - до 10 в 6 степени копий/мл - диагноз достоверный.
• Более чем 10 в 6 степени копий/мл - большая ВН.

Лаборатории могут выполнять анализ ПЦР на ВИЧ в режиме Real-time. Это подразумевает наблюдение и численную оценку накапливания продуктов ПЦР при автоматической фиксации результатов.