Какие бывают группы крови и как происходит их определение. Методы определения групп крови Группа крови определяется особенностями

Групповую принадлежность крови по системе АВО определяют с помощью реакции агглютинации. Используют три способа определения групп крови по системе АВО:

С помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

С помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

1. Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Суть метода в обнаружении в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25С.

Методика проведения реакции

1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого), после чего на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(1), А(11), B(III).

2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую - рядом с каплей стандартной сыворотки (количество исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закруглёнными краями перемешивают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 с, наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(2).

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10- 30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

Определение резус-фактора Антигенная система резус-фактора

В 1940 г К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.

Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, С, с, Е, е (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует). С и с, а также Е и е - аллельные антигены. Каждая из хромосом несёт только три гена из пяти: D, С или с, Е или е.

Наиболее активен из всех антигенов Rh0 (D) - резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (Rh-).

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.

Способы определения Rho(D) в клинической практике

Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), разведённую 33% раствором декстрана затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступаетв течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путём однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Трактовка результатов.

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови

Правило Оттенберга

подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента. По правилу Оттенберга, можно переливать кровь, эритроциты которой не могут быть агглютинированы сывороткой реципиента.

Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).

Первые попытки лечения некоторых заболеваний с использованием крови были отмечены еще в древности. Так Гиппократ еще в 460-370 г. до н.э. предлагал лечить душевные расстройства употреблением крови. Существуют сведения, что люди, страдающие эпилепсией, пожилые люди пили кровь умирающих гладиаторов для лечения и омоложения. Большим прорывом в исследовании крови стало открытие Уильямом Гарвеем закона кровообращения.

Впоследствии хирурги Лондона и Парижа экспериментировали с переливанием крови от одних животных другим. Первым человеком, которому перелили кровь животного стал студент из Кембриджа Семюэл Пепис, эксперимент прошел успешно и молодой человек не пострадал, вероятно, это связано с несовершенной техникой переливания крови, так как применялись гусиные перья и серебряные трубки и, вероятно, был перелит малый объем крови, которой не привел к клинически выраженным последствиям. Затем последовала череда многочисленных экспериментов по переливанию крови, которые приносили не только положительные, но и отрицательные результаты, в связи с чем, во Франции в 1670 году был принят закон о запрещении трансфузии.

В 1819 году выполнено первое переливание крови от человека человеку. С 1830 года переливание крови начали применять и России, в акушерской практике «в случаях сильной потери крови у рожениц», развитию этого метода лечения и спасения пациентов мешало незнание законов совместимости крови.

В 1901 году австралийским иммунологом Карлом Ландштейнером были открыты три группы крови А, В, О и во многом были объяснены неудачные попытки переливания крови от человека человеку. В 1930 году он был удостоен Нобелевской премии, затем последователи К. Ландштейнера Декостелло и Стурли открыли 4 группу крови.

В 1940 году в крови человека были выявлены антигены на поверхности эритроцитов - «резус-фактор».

Чем обусловлено деление на группы крови

Кровь состоит из жидкой части - плазмы и форменных элементов (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов), на поверхности эритроцитов имеются антигены-своеобразные выросты, по наличию которых и обусловлено деление на группы крови.

В настоящее время для определения группы крови принято пользоваться системой АВО. По этой системе группы делятся на I(О), II-(А), III-(В) и IV(АВ), это значит, что у носителей I группы крови на поверхности эритроцита отсутствуют специфические антигены, а в плазме крови определяются α и β антитела, у носителей II группы на поверхности эритроцитов находится А-антиген, а в плазме определяется β антитела, у носителей III группы на поверхности эритроцитов имеется В антиген, а в плазме крови α-антитела, у носителей IV группы крови – А и В антигены, в плазме антител не определяется.

Может ли поменяться группа крови в течение жизни

Группа крови определяется наличием или отсутствием специфических антигенов на поверхности эритроцитов, в течение жизни она изменяться не может, так как процесс формирования антигенного состава эритроцитов начинается еще задолго до рождения человека. Выявлено присутствие антигена А на поверхности эритроцита у плода при сроке беременности 40 дней, однако полное созревание антигенной системы происходит в течение нескольких месяцев после рождения.

Что такое резус-фактор?

Резус-фактор был первоначально выявлен в крови обезьян макак-резус, поэтому и получил название – «резус-фактор». Это также антиген на поверхности эритроцита, отличающийся от антигенов системы АВО химическим составом. У 84% выявляется наличие антигена D и они являются резус-положительными, у 16% этого антигена на поверхности эритроцитов не выявляется и они являются резус-отрицательными.

Помимо указанных, наиболее распространенных систем АВО и Rh-фактор, существуют менее распространенные антигенные системы: Kell, Kidd, Duffy и другие, которые являются второстепенными антигенными системами крови.

Анализ на определение группы крови

Для определения группы крови и резус-фактора выполняется забор венозной крови. Специальной подготовки при проведении анализа не требуется. Стоит лишь воздержаться от приема пищи минимум за 3 часа до исследования.

Существуют различные методики определения группы крови, но наибольшее распространение получила методика определения с помощью стандартных сывороток. В стандартной сыворотке имеется заранее известный набор антител, на поверхности эритроцитов находятся специфические антигены, при «встрече» антигена с антителом формируется комплекс антиген-антитело, что приводит в конечном итоге к агглютинации эритроцитов (то есть склеиванию эритроцитов и выпадению их в осадок).

Следующий метод - это определение группы крови с помощью цолликлонов. Цолликлоны-это гибридные антитела, полученные в живом организме мышей.

Экспресс-методика «эритротест» с применением специальных планшетов, на которые нанесены серии цолликлонов.

Определение резус-принадлежности также выполняется с помощью специальных реагентов, которые помогают выявить наличие антигена D на поверхности эритроцитов.

Зачем сдавать анализ на группу крови

Показания для определения группы крови и резус-фактора достаточно широкие. Это исследование выполняется: при хирургических вмешательствах (плановых и экстренных), при плановом ведении беременности, в родах, при необходимости переливания компонентов крови, свежезамороженной плазмы, при гемолитической болезни новорожденных. Стоит отметить, что никому не будет лишним знать свою группу крови и резус-фактор, особенно, если речь идет о девочке, то группу крови и резус фактор стоит знать до планирования беременности, так как наблюдение беременных с отрицательным резус-факторам осуществляется особым образом.

Совместимость при переливании крови

В настоящее время переливание крови осуществляется только соответствующей группы и резус-фактора. Носители IV группы крови ранее считались универсальными донорами, так как в плазме крови отсутствуют антитела и переливание этой группы возможно реципиентам с I, II и III группами крови без развития гемолиза (разрушения эритроцитов). При переливании несоответствующей группы крови развиваются посттранфузионные осложнения, которые обусловлены массивным разрушением эритроцитов: гемолитический шок, тромбозы и эмболии, циркуляторная перегрузка, анафилактический шок, цитратно-калиевая интоксикация, заражение гемоконтактными инфекциями и другие.

Самой распространенной группой крови является первая и встречается примерно у 40% населения, следующая по частоте-вторая, затем-третья. Носители резус-отрицательной группы встречаются в 5 раз реже, чем положительной. Наиболее редкой считается IV (О) Rh отрицательная группа крови она встречается примерно у 04-0.6% населения

Совместимость крови при планировании ребенка

Какие проблемы могут возникнуть при планировании беременности, можно ли предположить, какая группа крови и резус фактор будут у ребенка по крови родителей?

При планировании ребенка могут возникнуть проблемы как по системе АВО, так и по системе резус-фактор. Особое внимание стоит уделять женщинам с первой группой крови, так как в плазме крови находятся антитела α и β которые могут взаимодействовать с антигенами на поверхности эритроцитов плода. Эта ситуация может развиться, если у плода вторая или третья группа крови. Обычно, конфликт по системе АВО развивается во время первой беременности и не представляет опасности для плода и здоровья женщины.

Во время беременности врач может назначить исследование крови на групповые антитела и контролировать их в течение всей беременности.

Более серьезной является ситуация в случае развития резус-конфликта. Если резус-отрицательная женщина беременна и у плода положительный резус-фактор, возникает вероятность развития резус-конфликта. Причем при первой беременности он может быть выражен минимально, а с последующими беременностями степень его выраженности нарастает. Это обусловлено формированием анти-D антител (иммуноглобулины класса G) в крови матери в ответ на попадание резус положительных эритроцитов плода как во время вынашивания беременности, так и во время родов. Попаданию антиген-положительных эритроцитов плода к матери также способствуют аборты, выкидыши и внематочная беременность. При последующих беременностях эти антитела могут попадать в кровоток плода, вызывая разрушение эритроцитов. Как раньше было отмечено, взаимодействие антигена с антителом вызывает гемолиз (разрушение) эритроцита, у плода развивается анемия, и как следствие, кислородное голодание разной степени выраженности.

Наследование групп крови осуществляется в одинаковой степени от обоих родителей, по закону Менделя. Если оба родителя имеют первую группу крови, ребенок будет также иметь первую группу. У родителей с первой и второй группой дети могут иметь как первую, так и вторую группу, аналогичная ситуация с первой и третьей группой. Если родители являются носителями четвертой группы, то у детей может быть вторая, третья и четвертая группа. У родителей с второй и третьей группой дети могут иметь любую группу крови.

Особенности жизни и питания с определенной группой крови и резус-фактором.

В конце XX века американские врачи-натуропаты предложили особенности питания для пациентов с различными группами крови. Основная цель - профилактика возможных заболеваний, связанных с носительством определённых групп крови. Но, стоит отметить, что с точки зрения доказательной медициной данная теория не проверялась.

Согласно этой теории, пациенты с первой группой, самой древней, должны больше употреблять в пищу мяса (красные сорта), рыбы и морепродуктов, субпродуктов (сердца, почки, печень). Из овощей картофель, капуста, зелень, бобовые.

Людям со второй группой крови стоит употреблять в пищу больше свежих фруктов, рыбы, морепродуктов, птицу (индейку, курятину), стоит ограничить мясные, молочные продукты, мучное. Из напитков предпочтение отдать зеленому чаю, кофе, воде. Стоит включить в свою повседневную жизнь занятия спортом (плавание, велоспорт например).

Обладателям четвертой, самой молодой группы, стоит увеличить в рационе содержание свежих овощей, допускается употребление в пищу мяса, морепродуктов, рыбы, кисломолочных продуктов. Физические нагрузки не должны быть очень напряженные.

Определение групп крови нашло большое значение и распространение в современной медицине. Сейчас сложно представить лечебное учреждение, где не выполняется переливание крови или ее компонентов. Хочется отметить, что свою группу крови и резус крови должен знать каждый человек, лучше, если эта информация будет занесена в документ, удостоверяющий личность. Будьте здоровы.

Врач терапевт Чугунцева Е.А.

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия ; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

На белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

С помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

Отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом - обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 0 С.

Классические группы крови АВ0

В зависимости от наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов α и β, всех людей делят на четыре группы:

Группа 0(I): в эритроцитах агглютиногенов нет, в сыворотке присутствуют агглютинины α и β;

Группа А(II): в эритроцитах - агглютиноген А, в сыворотке - агглютинин β;

Группа В(Ш): в эритроцитах присутствует агглютиноген В, в сыворотке выявляют агглютинин α;

Группа АВ(IV): в эритроцитах - агглютиногены А и В, агглютининов в сыворотке нет.

В последнее время в системе АВ0 обнаружены разновидности классических антигенов А и В, а также другие антигены.

Подтипы антигена А

Антиген А нельзя считать однородным, существует два основных его подтипа: А 1 и А 2 . Эритроциты с подтипом агглютиногена А 1 встречают намного чаще, чем с подтипом А 2 (88% и 12% соответственно). Поэтому при наличии агглютиногена А 1 его обозначают просто как А, а обозначение с индексом применяют только для относительно редко-

Таблица 6-1. Группы крови по системе АВ0

го агглютиногена А 2 . В соответствии с этим группа А(II) имеет две подгруппы: А(II) и А 2 (II), а группа АВ(IV) - АВ(IV) и А 2 B(IV) (табл. 6-1). Агглютиногены А 1 и А 2 отличаются друг от друга по свойствам.

Подтип А 1 обладает большей адсорбционной возможностью по сравнению с агглютиногеном А 2 , он сильнее адсорбирует агглютинин a из сыворотки, поэтому его называют сильным, а подтип А 2 - слабым.

Эритроциты с агглютиногеном А 2 имеют более низкую агглютинабельность.

Подгруппы с агглютиногенами А 1 и А 2 обладают различными свойствами сывороток. Сыворотка подгрупп А 2 (II) и А 2 В (IV) довольно часто содержит агглютинин, названный Ландштейнером и Левином экстраагглютинином a 1 , дающим агглютинацию только с эритроцитами А 1 и не дающим агглютинации с эритроцитами А 2 . В то же время в сыворотке подгрупп А(II) и АВ(IV) довольно редко, но встречается экстраагглютинин a 2 , не агглютинирующий эритроциты А 1 , а дающий агглютинацию с эритроцитами А 2 .

Существуют варианты эритроцитов с ещё более слабовыраженными агглютинабельными свойствами, что связано с наличием в них подтипов А 3 , А 4 , A z и др. Несмотря на то, что эти слабые антигены встречают довольно редко, они имеют определённое клиническое значение.

Подтипы антигена В

Групповой антиген В отличается большей однородностью. Описанные редкие его варианты (В 2 , В 3 , B w и др.) существенного клинического значения не имеют.

Антиген 0 и субстанция Н

Позже в первой группе крови 0(I) была найдена специфическая субстанция, также обозначенная символом «0». Фактор 0 - агглютиноген, присущий эритроцитам групп 0(I), А 2 (II), А 2 B(IV).

Для эритроцитов всех групп характерно наличие субстанции Н, её считают общим веществом-предшественником. Субстанцию Н чаще встречают у лиц с первой группой крови, в других же она содержится в незначительном количестве. У некоторых жителей индийского города Бомбей обнаружена группа, не содержащая агглютиногенов 0, А, В, Н, но содержащая антитела α, β, анти-0 и анти-Н. Впоследствии этот редкий тип крови, обнаруженный и у жителей других стран, получил название «тип Бомбей».

«Кровяные химеры»

В настоящее время известны так называемые кровяные химеры, обусловленные одновременным пребыванием в организме человека эритроцитов, принадлежащих двум фенотипам АВ0. В естественных условиях явление кровяной химеры встречают у близнецов. Оно может также появиться при пересадке аллогенного костного мозга или переливании массивных объёмов крови. При определении группы крови и резус-принадлежности в условиях наличия кровяной химеры, как правило, получают искажённый результат.

Способы определения группы крови

Групповую принадлежность крови по системе АВ0 определяют с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют три способа определения групп крови по системе АВ0:

С помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

С помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Существует следующая общепринятая тактика при определении группы крови.

При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, или цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрёстным методом.

Группу крови считают определённой только в том случае, если лаборатория подтвердила данные, полученные врачом стационара. Если результаты исследований расходятся, оба исследования нужно повторить.

При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови) врач стационара определяет группу крови сам (в лаборатории перепроверку выполняют, но постфактум). В таких случаях также используют реакции с изогемагглютинирующими сыворотками (или поликлонами), но при возможности целесообразно применение перекрёстного метода.

Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток .

Суть метода сводится к обнаружению в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25С.

Необходимое оснащение:

1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп 0(I), A(II), В(III) и АВ(IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 С (в холодильнике). Срок годности сыворотки указан на этикете. Титр сыворотки (также указан на этикетке) должен быть не ниже 1:32 (для сыворотки В(Ш) - не ниже 1:16/32). Под титром сыворотки понимают то максимальное её разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают так, чтобы они имели определённый цвет: 0(I) - бесцветная, А(II) - синяя, В(III) - красная, АВ(IV) - ярко-жёлтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитарная масса, плазма и др.).

2. Белые фарфоровые или эмалированные тарелки, или любые другие; пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(I), А(П), В(Ш), AB(IV).

3. Изотонический раствор хлорида натрия.

4. Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стёкла).

Методика проведения реакции

Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой её забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 с, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы A 2 (II).

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой (рис. 6-1).

Рис. 6-1. Виды агглютинации: а - агглютинации нет; б - пескообразная агглютинация; в - лепестковая агглютинация

При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, в ней не обнаруживают никаких зёрнышек (агглютинатов).

Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин (табл. 6-2).

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглюнитининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(I), А(II) и В(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0(IV).

Таблица 6-2. Оценка результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого антигена А 2 реакция агглютинации с гемагглютинирующими сыворотками групп 0(I) и B(III) начинается позже (на 3-4-й мин).

Идентификацию подгрупп антигена А проводят в серологической лаборатории с помощью специальных экстрактов из семян Dolichos biflorus и Ulex Europeus. Первый из них агглютинирует эритроциты с антигеном А 1 , но не реагирует с антигеном А 2 , а второй - наоборот.

Процедура определения групп крови по системе АВО заключается в выявлении антигенов А и В в эритроцитах с помощью стандартных антител и использованием агглютининов в плазме или сыворотке анализируемой крови стандартными эритроцитами. Методика разработана в начале XX века и до сих пор активно применяется в медицине. Определение антигенов А и В осуществляется благодаря цоликлонам анти-А и анти-В.

Основные понятия

У доноров всегда определяются не только антигены в эритроцитах, но и агглютинины в сыворотке (плазме) с применением стандартных эритроцитов. В качестве биоматериала используется венозная кровь. Перед исследованием необходимо отказаться от жирной пищи за сутки до анализа и не курить за полчаса до сдачи теста. Группы крови определяют дважды: сначала в лечебном отделении, где заготавливается материал, а затем подтверждают исследованием в лаборатории.

Определение групп крови по системе АВО является основным тестом, который используется в трансфузиологии. Также подобная система групп крови есть у некоторых животных, например у шимпанзе, горилл и бонобо.

История открытия

В науке существует общепринятое мнение о том, что методика определения групп крови по системе АВО была выявлена впервые Карлом Ландштейнером, австрийским учёным, в 1900 году. Тогда он описал в своём труде три типа антигенов. За это через тридцать лет ему была присуждена Нобелевская премия по медицине и физиологии. Из-за того, что между учёными раньше не было тесных связей, позже установили, что чешский врач-серолог Ян Янский независимо от изысканий К. Ландштейнера впервые описал четыре группы крови человека, но его исследования были не известны широкой аудитории. В настоящее время именно классификация, разработанная Я. Янским, применяется в России и республиках бывшего СССР. В США У. Л. Мосс создал свою похожую работу в 1910 г.

Методика определения групп крови по системе АВО с помощью цоликлонов

Группа крови должна определяться в помещении с хорошим освещением с соблюдением диапазона температуры от 15 до 25 градусов Цельсия, так как отклонения от этой нормы могут повлиять на результаты исследования. На пластинке или тарелке пишутся инициалы и фамилия пациента. Слева направо или по кругу наносят стандартные обозначения групп (О(I), A(II), В(III)). Под ними размещают по капле соответствующие сыворотки отдельными пипетками для каждого вида. Затем к ним добавляется кровь пациента. Материал для исследования берется из мочки уха или пальца. Этого требует техника определения группы крови по системе АВО.

Правомерно также использование эритроцитов, находящихся в пробирке после того, как образовался сгусток. Нужно, чтобы количество сыворотки было больше количества добавленной крови в десять раз. После этого капли перемешиваются стеклянными палочками (отдельно для каждой). В течение пяти минут, аккуратно покачивая пластинку, смотрят за появлением реакции гемагглютинации. Она обнаруживается в том, что появляются маленькие красные комочки, сливающиеся затем в более крупные. Сыворотка в это время практически полностью теряет цвет.

Для того чтобы устранить ложную гемагглютинацию простого склеивания эритроцитов, нужно через три минуты добавить одну каплю физиологического раствора и проверить, сохраняется ли агглютинация. Если да, то она является истинной. Все, определение групп крови по системе АВО на этом завершено.

Толкование результатов

В результате могут наблюдаться четыре реакции:

не происходит агглютинация ни с одной из сывороток - первая группа О(I);
реакция проявилась с сыворотками I(ab) и III(a) - вторая группа А(II);
агглютинация наступает с сыворотками I(ab) и II(b) - третья группа В(III);
если реакция происходит с тремя сыворотками, нужно провести дополнительную процедуру с реактивами группы АВ(IV), которые являются стандартными; если агглютинация в такой капле отсутствует, можно считать, что это 4-я группа крови АВ(IV).

Экспресс-метод для резус-фактора

Методика определения групп крови по системе АВО предполагает одновременное выявление резус-фактора (Rh).

Поверхность пластинки предварительно смачивают и пишут на ней «контрольная сыворотка» и «сыворотка антирезус». Затем под надписями располагают одну-две капли нужных реактивов и добавляют к ним анализируемый материал. Для этого также можно использовать кровь из пальца (в таком же количестве, как и объём сыворотки) или эритроциты, оставшиеся на дне пробирки после появления сгустка (половина объёма сыворотки). Выбор материала на конечный результат не влияет. Затем кровь и сыворотка перемешиваются сухой стеклянной палочкой, после чего в течение пяти минут ожидают наступления реакции. Для того чтобы устранить ложные показания, через три-четыре минуты добавляют изотонический раствор натрия хлорида (всего несколько капель). Определение группы крови по системе АВО и Rh проводится очень часто.

Если агглютинация эритроцитов в капле с сывороткой происходит, это указывает на положительный резус крови. По статистике Rh+ встречается у 85 % населения планеты. Отсутствие её позволяет говорить о резус-отрицательной принадлежности. Если агглютинация появилась в контрольной сыворотке, значит она пришла в негодность. К сожалению, алгоритм определения группы крови по системе АВО не всегда срабатывает идеально.

Какие ошибки могут быть допущены при данной методике?

Неточности при определении принадлежности крови той или иной группе зависят от следующих причин:

Технических.
Биологической специфики исследуемой крови.
Неполноценного характера стандартных сывороток и эритроцитов.

Технические ошибки

Возможные погрешности при определении группы крови системы АВО перекрестным способом:

Ошибки биологической специфики

Погрешности, связанные с биологической спецификой анализируемой крови, делятся на два типа.

Зависящие от особенностей эритроцитов.
Ошибки, обусловленные биологическими особенностями сыворотки.

Рассмотрим каждый вид более подробно.

Зависящие от особенностей эритроцитов

Поздняя агглютинация, объясняющаяся «слабыми» формами эритроцитов и антигенов. Для того чтобы избежать ошибок, определять группу крови доноров и реципиентов нужно с использованием стандартных эритроцитов. Индентифицировать агглютиноген А 2 следует повторным исследованием с другими видами реагентов и другой посуды, увеличив время регистрации реакции.
«Панагглютинация» («аутоагглютинация») - умение крови проявлять одинаковую реакцию неспецифического характера со всеми сыворотками, в том числе с собственной. Через пять минут острота такой агглютинации слабеет, хотя должна усиливаться. Подобные случаи наблюдаются у онкобольных, обожжённых и др. В качестве контроля необходимо оценить проявление агглютинации анализируемых эритроцитов в стандартной сыворотке четвёртой группы и физрастворе. При «панагглютинации» группу крови определяют в результате тройного отмывания эритроцитов. Если оно не даёт нужного результата, стоит произвести повторный забор образца крови в согретую перед процедурой пробирку и поставить пробу в термоконтейнер, чтобы способствовать поддержанию температуры 37 градусов Цельсия и выше. Затем следует доставить в лабораторию, где сохраняется указанная выше температура и используются подогретые физиологический раствор, пластинка и реактивы.

Иногда эритроциты анализируемой крови располагаются как «монетные столбики», и их можно принять за агглютинаты. Если добавить две капли изотонического раствора и мягко покачать планшет, красные кровяные клетки занимают правильную позицию.
Неполная или смешанная агглютинация, встречающаяся у пациентов со второй, третьей и четвёртой группами в результате трансплантации костного мозга или в первые три месяца после переливания крови 0(I).

Обусловленные биологическими особенностями сыворотки

Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных эритроцитов и сывороток

Слабые сыворотки с прошедшим сроком годности или имеющие титр меньше 1:32 способны зарождать слабую и позднюю агглютинацию. Применение таких реактивов недопустимо.

Использование негодных стандартных эритроцитов или сывороток, приготовленных в нестерильных условиях и законсервированных в недостаточной степени, приводит к появлению «бактериальной» агглютинации, имеющей неспецифическую природу.

Существует множество популярных предположений о группах крови системы АВО, появившихся непосредственно после её обнаружения в разных мировых культурах. Так, например, в 30-е годы прошлого столетия в Японии и некоторых других странах получила популярность теория, связывающая группу крови с тем или иным типом личности. Подобные теории популярны и на сегодняшний день.

Есть также мнение, что человек, имеющий группу А, подвержен тяжёлому похмелью, О связана с хорошими зубами, а группа А2 - с самым высоким уровнем IQ. Но научно такие утверждения не доказаны.

Мы рассмотрели определение групп крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток.

КАТЕГОРИИ